背景資料

凝膠純化可以根據(jù)大小分離和純化DNA片段。該程序從標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖凝膠電泳開始，根據(jù)堿基對的長度分離DNA。在電泳后，可以從瓊脂糖凝膠中切下DNA條帶，然后純化DNA樣品。這是一種常用的分子克隆技術(shù)，例如基于克隆的聚合酶鏈反應(yīng)或限制性酶。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳的Protocol做如下修改：

注：凝膠純化可以使用盡可能低濃度的瓊脂糖凝膠（在可分辨的范圍），所以如果可能的話保持在0.7%-0.8%的范圍內(nèi)。

注：需要得到分辨更好的條帶。這可以通過使用更寬的凝膠梳和在較低電壓下運(yùn)行凝膠來實(shí)現(xiàn)。

注：如果想要預(yù)留更多的位置來切取條帶和減少DNA污染，可以在樣品-樣品之間預(yù)留空泳道。

注：為了減少DNA損傷的風(fēng)險(xiǎn)，限制DNA在紫外線下暴露的時(shí)間。

2.一旦凝膠電泳結(jié)束，需要把凝膠移動到一個(gè)紫外線箱中(確保適當(dāng)?shù)淖贤饩€保護(hù)--尤其是對你的眼睛！)，由于塑料會阻擋大部分紫外線，所以需要從凝膠托盤上取下凝膠，之后用干凈的無菌刀片，從凝膠中切取所需的DNA片段。

注：為了保護(hù)紫外線箱，如果可以的話，把凝膠放在玻璃板上是個(gè)好主意。與塑料托盤相比，玻璃板將不會顯著減少紫外線，但將保護(hù)紫外線盒不被刀片切割。

注：試著將條帶周圍多余的凝膠去除。在DNA純化過程中，這一點(diǎn)尤為重要，因?yàn)樵S多試劑盒不能在一個(gè)體系中處理超過固定體積的凝膠。

3.將凝膠放入標(biāo)記的EP管中。

4.用秤稱量。用空管對體系進(jìn)行校零，之后對凝膠進(jìn)行稱重?；蛘?，可以用凝膠管的重量減去空管的重量。凝膠的重量與其液體體積成正比，用于確定在DNA分離過程中每個(gè)緩沖液的添加量。

5.最后，需要從凝膠中分離出DNA。這是可以使用商用的凝膠純化試劑盒。遵循相關(guān)說明書完成實(shí)驗(yàn)即可。

注：在使用凝膠純化的DNA進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)之前，確定分離出的DNA的濃度通常是很重要的。

提示和常見問題

怎樣才能更好地提高條帶的分辨率？

提高DNA條帶分辨率的幾種簡單方法包括：

(A)在較低電壓下運(yùn)行較長時(shí)間的電泳；

(B)使用更寬的凝膠梳；

(C)在上樣孔中加入較少的DNA。

怎樣才能更好地分離條帶？

如果大小相近的條帶，可以通過調(diào)整凝膠百分比，使之更好的分離。較高比例的瓊脂糖凝膠將有助于分離較小的條帶，而較低百分比的凝膠將有助于分離較大的條帶。

10%規(guī)則：

對于樣品，要比所需的體積多10%，因?yàn)榭赡軙谏蠘舆^程中丟失幾個(gè)微升。例如，如果要在10μL中加1.0μg的DNA，則在11μL中加入1.1μg。