背景[1-3]
小鼠雪旺細胞是原代培養(yǎng)的小鼠雪旺細胞經長時間培養(yǎng)后自發(fā)轉化而成的。2002年十二月提交到ATCC的培養(yǎng)物污染了支原體。其后代通過BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后六周，用Hoechst染色、PCR和標準培養(yǎng)測試進行支原體檢測，結果都呈陰性。
雪旺細胞沿神經元的突起分布，包裹在神經纖維上，雪旺細胞的外表面有基膜，能分泌神經營養(yǎng)因子，促進受損的神經元的存活及其軸突的再生，參與周圍神經系統(tǒng)中神經纖維的構成。研究表明，神經元延伸時對與其接觸的底物是非常具有選擇性的，而且一旦與雪旺細胞接觸，神經纖維的延伸就會嚴格限制在Bungner帶內。
小鼠雪旺細胞
雪旺細胞是神經嵴的衍生物，形成周圍神經髓磷脂軸突的髓鞘。它們分別環(huán)繞在周圍神經軸突的軸上，沿著軸突節(jié)形成一層髓磷脂髓鞘。雪旺細胞對周圍神經的發(fā)育，功能和再生起著重要作用。當軸突快死亡時，雪旺細胞環(huán)繞其周圍幫助消化軸突。留下連續(xù)的雪旺細胞形成一個空的管道，新的軸突在管道的末端開始生長。在周圍神經中雪旺細胞的數(shù)量是受到嚴格調控的。
體外增殖受到諸如PDGF，F(xiàn)GF，神經元和其它多肽類生長因子的刺激。雪旺細胞提供相對簡單，明確，易得的哺乳動物模型以用來研究一系列發(fā)育問題。了解血旺細胞的生物學特征具有重要的臨床意義，不僅對于研究神經病變產生的環(huán)境和神經的再生，而且細胞或他們的前體可能特別適合用作中樞神經系統(tǒng)修復的植入物。
應用[4][5]
用于成年小鼠坐骨神經雪旺細胞體外培養(yǎng)的實驗研究
加入了雪旺細胞生長所需要的生長因子（forskolin、heregulin-β-1、堿性成纖維細胞生長因子）以期模擬體內實驗的效果。
方法：1.實驗動物：綠色熒光蛋白（GFP）轉基因小鼠。c57小鼠,雌雄不限。
2. 體外預變性：小鼠頸椎脫臼處死,分離切取坐骨神經,放于含有DMEM.DMEM+10%FBS、SCCM培養(yǎng)液中培養(yǎng),1周后待檢。體內預變性：小鼠10%戊巴比妥腹腔注射麻醉,暴露右側坐骨神經,在遠離脊神經根部切斷坐骨神經,并使斷端游離。術后1、2、3周取材待檢。
3. 細胞培養(yǎng)及冰凍切片制作：分別將不同培養(yǎng)液中培養(yǎng)的及新鮮的坐骨神經組織漂洗,切碎,消化酶溶解,接種培養(yǎng),傳代。48小時后對SCCM組細胞進行純化并做冰凍切片。
4. 組織和細胞免疫熒光檢測：取各組的冰凍切片及培養(yǎng)的原代細胞行兔抗S100β及p75NTR免疫熒光染色。激光共聚焦顯微鏡觀察組織切片中綠色熒光蛋白及S100p表達情況,普通熒光顯微鏡下觀察細胞染色情況,隨機選取5個視野計算細胞純度。
5. 激光共聚焦下觀察拍照。
6. 統(tǒng)計學處理：所有計數(shù)值以均數(shù)±標準差（x±s）表示,應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。組間均數(shù)比較單因素方差分析（One-Way ANOVA）,多重比較方差齊性下采用LSD方法,方差不齊時采用Dunnett T3方法。P<0.05提示差異具有統(tǒng)計學意義。
結果：1.GFP小鼠組中,體外預變性1周后坐骨神經組織切片綠色熒光表達最強,p75熒光表達最強,說明體外預變性的時間是一周；
2. GFP小鼠組中,SCCM組中1、2、3周綠色熒光表達和p75熒光表達最強。SCCM組與DMEM組和DMEM+10%FBS組及對照組雪旺細胞數(shù)、細胞純度和細胞密度均具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
3.C57小鼠組中,對于SCCM培養(yǎng)液中預先培養(yǎng)的坐骨神經獲取的細胞S100p蛋白的免疫熒光染色,發(fā)現(xiàn)幾乎所有的雙極或三極樣細胞均為陽性,隨機選取三個視野計算純度為98%。SCCM組與DMEM+10%FBS組和對照組比較,雪旺細胞數(shù)和細胞密度均具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。各組原代細胞培養(yǎng)48小時后,雪旺細胞純度,DMEM+10%FBS、SCCM中分別為82.83±3.43%,89.67±3.14%。
參考文獻
[1]Identification of the ca2+in dependent enddoeytic hyaluronan receptor photaffinity crosslinking reagent.Yannariello-Brown J,Frost ST,Weigel PH,etal.Journal of Biochemistry.1992
[2]The Biomedical Engineering Handbook.Bellamkonda R,Aebischer P.CRC.1995
[3]Factors influencing the release of proteins by cultured schwann cells.DJ Carey,RP Bun.The Journal of Cell Biology.1981
[4]Axons regulate Schwann cell expression of the major myelin and NGF receptor genes.G Lemke,M Ch.Development.1988
[5]汪海濱.成年小鼠坐骨神經雪旺細胞體外培養(yǎng)的實驗研究[D].南方醫(yī)科大學,2013.