背景^[1-3]

U-937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞是由Nilsson K實(shí)驗(yàn)室于1974年從一名37歲的患有惡性組織細(xì)胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來(lái)的研究顯示該細(xì)胞在人混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和維A酸的誘導(dǎo)下可以向終末單核細(xì)胞分化。該細(xì)胞不合成免疫球蛋白，EBV陰性；可產(chǎn)生溶菌酶、β-2-微球蛋白，受PMA刺激后可產(chǎn)生TNF-α；表達(dá)C3R；可作轉(zhuǎn)染宿主；表達(dá)Fas，對(duì)TNF和抗Fas的抗體敏感。

U-937人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

接收后處理：

接收到細(xì)胞后，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新皿中或者瓶中，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。次傳代推薦傳代密度為1:2。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

應(yīng)用^[4][5]

用于單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）體外趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的實(shí)驗(yàn)研究

1. 模擬腫瘤微環(huán)境,檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）在體外對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的趨化作用；2.為研究單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中趨化腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[方法]1.人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）復(fù)蘇、原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)；

2. 單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）加入[ranswell小室下室,人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）接種到Transwell小室上室,進(jìn)行體外趨化實(shí)驗(yàn)；

3. 碳酸聚酯膜沖洗、固定、HE染色,鏡下閱片觀察趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）數(shù)量；

4. 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)趨化細(xì)胞離心濃縮液中人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）數(shù)量,檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的能力；

5. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±S）表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)方法為單因素方差分析（one-way AVONA）,P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

[結(jié)果]1.單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的趨化作用高于空白對(duì)照組,有顯著性差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；2.單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）的趨化能力和濃度相關(guān),隨著濃度增加,對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的趨化作用越明顯（P<0.05）。

[結(jié)論]單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）具有趨化作用,不同濃度單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）趨化活性存在差異,單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）濃度越大,對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的促遷移作用越明顯。

參考文獻(xiàn)

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[2]Tumor-associated macrophages and the profile of inflammatory cytokines in oral squamous cell carcinoma[J].Oral Oncology.2012

[3]The effect of vascular endothelial growth factor C expression in tumor-associatedmacrophages on lymphangiogenesis and lymphatic metastasis in breast cancer[J].Mingxing Ding,Xiaoyan Fu,Haidong Tan,Ruiquan Wang,Zhimei Chen,Shiping Ding.Molecular Medicine Reports.2012(5)

[4]Tumor‐associated macrophages promote angiogenesis and lymphangiogenesis of gastric cancer[J].Hui Wu,Jian‐Bo Xu,Yu‐Long He,Jian‐Jun Peng,Xin‐Hua Zhang,Chuang‐Qi CHEN,Wen Li,Shi‐Rong Cai.J.Surg.Oncol..2012(4)

[5]于謙.單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）體外趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的實(shí)驗(yàn)研究[D].昆明醫(yī)科大學(xué),2016.