背景^[1-3]

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞是于1974年從一名37歲的患有惡性組織細(xì)胞性淋巴瘤的白人男性的胸水中分離建立的。1979年來(lái)的研究顯示該細(xì)胞在人混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物上清、佛波酯、Vit D3、γ-IFN、TNF和維A酸的誘導(dǎo)下可以向終末單核細(xì)胞分化。該細(xì)胞不合成免疫球蛋白，EBV陰性；可產(chǎn)生溶菌酶、β-2-微球蛋白，受PMA刺激后可產(chǎn)生TNF-α；表達(dá)C3R；可作轉(zhuǎn)染宿主；表達(dá)Fas，對(duì)TNF和抗Fas的抗體敏感。

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

將細(xì)胞懸液按1：2到1:5比例分到新皿中或者瓶中，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。次傳代推薦傳代密度為1:2。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為例；

1，細(xì)胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2，4min，1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度1-2xE6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)氮入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4][5]

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞可以用于單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）體外趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞（U937）的實(shí)驗(yàn)研究

模擬腫瘤微環(huán)境,檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)在體外對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)的趨化作用；2.為研究單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中趨化腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)中的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[方法]1.人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)復(fù)蘇、原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)；

2. 單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)加入[ranswell小室下室,人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)接種到Transwell小室上室,進(jìn)行體外趨化實(shí)驗(yàn)；

3. 碳酸聚酯膜沖洗、固定、HE染色,鏡下閱片觀察趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)數(shù)量；

4. 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)趨化細(xì)胞離心濃縮液中人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)數(shù)量,檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)趨化人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)的能力；

5. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)方法為單因素方差分析(one-way AVONA),P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

[結(jié)果]1.單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)的趨化作用高于空白對(duì)照組,有顯著性差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2.單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)的趨化能力和濃度相關(guān),隨著濃度增加,對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)的趨化作用越明顯(P<0.05)。

[結(jié)論]單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)具有趨化作用,不同濃度單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)趨化活性存在差異,單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)濃度越大,對(duì)人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞(U937)的促遷移作用越明顯。

參考文獻(xiàn)

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[3]Chemokine Networks and Breast Cancer Metastasis[J].Lalage Wakefield;Kent Hunter.Breast Disease,2006

[4]CCL2(Monocyte Chemoattractant Protein-1)in cancer bone metastases[J].Matt J.Craig;Robert D.Loberg.Cancer and Metastasis Reviews,2006(4)

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