背景^[1-3]

NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系是一種來(lái)源于人肺鱗癌組織的細(xì)胞系，通常被用于研究肺鱗癌的生物學(xué)特性和治療策略。這種細(xì)胞系具有一些重要的生物學(xué)特性，例如上皮細(xì)胞樣形態(tài)、高侵襲性等。此外，NCI-H2170細(xì)胞系還可以用于基因表達(dá)分析和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究，以探索肺鱗癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。

NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

貼壁生長(zhǎng)：NCI-H2170細(xì)胞系在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)貼附在培養(yǎng)瓶壁上生長(zhǎng)，這是其突出的形態(tài)學(xué)特征。

腫瘤細(xì)胞特性：NCI-H2170細(xì)胞系是一種腫瘤細(xì)胞系，具有腫瘤細(xì)胞的特性，例如增殖能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快、對(duì)生長(zhǎng)信號(hào)的依賴(lài)性強(qiáng)等。

侵襲性強(qiáng)：NCI-H2170細(xì)胞系的侵襲性較強(qiáng)，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散。

基因表達(dá)異常：NCI-H2170細(xì)胞系的基因表達(dá)譜異常，可以用于探索肺鱗癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制。

NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系

NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備基礎(chǔ)培養(yǎng)基(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二．NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

應(yīng)用^[4-5]

NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系可以用于轉(zhuǎn)錄因子SOX2上調(diào)DEK促進(jìn)肺鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)展的研究

肺鱗狀細(xì)胞癌(LSCC)是一種普遍的進(jìn)行性肺癌亞型。本研究旨在證實(shí)SOX2/DEK軸對(duì)LSCC發(fā)育的調(diào)控作用。

研究方法:采購(gòu)4個(gè)LSCC細(xì)胞系(LTEP-S、SK-MES-1、NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系、NCI-H520)、1個(gè)正常的肺上皮細(xì)胞系BEAS-2B用于實(shí)驗(yàn),并臨床收集LSCC組織(n=83)和鄰近的正常組織,其中采用q RT-PCR和Westernblot檢測(cè)SOX2的表達(dá)。采用Kaplan-Meier分析LSCC-SOX2的表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性。采用CCK-8檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)沉默SOX2對(duì)LSCC細(xì)胞活力的抑制作用。應(yīng)用Ch IP檢測(cè)SOX2與DEK的結(jié)合。然后對(duì)LSCC細(xì)胞進(jìn)行功能增益和損失分析,應(yīng)用CCK-8和Transwell實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的活力、遷移和侵襲潛能。

結(jié)果:SOX2、DEK在LSCC組織以及NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系等細(xì)胞中的表達(dá)均上調(diào)。SOX2過(guò)表達(dá)與LSCC患者不良預(yù)后正相關(guān)。沉默SOX2削弱了LSCC細(xì)胞的活力、遷移和侵襲潛能。此外,SOX2可激活DEK的表達(dá),LSCC組織中DEK的表達(dá)與SOX2的表達(dá)呈正相關(guān),沉默DEK可減弱LSCC細(xì)胞的惡性行為。

結(jié)論:1.SOX2參與了LSCC的形成,在LSCC組織中高表達(dá),導(dǎo)致LSCC預(yù)后不良。

2. 沉默SOX2基因抑制了NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系等細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲潛能。

3. SOX2激活下游的DEK基因的表達(dá),驅(qū)動(dòng)NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系等細(xì)胞的惡性行為和腫瘤生長(zhǎng)。

4.沉默DEK基因顯著抑制了NCI-H2170人肺鱗癌貼壁細(xì)胞系等細(xì)胞的活力及遷移、侵襲能力,抑制了LSCC細(xì)胞的惡性表型。

參考文獻(xiàn)

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