背景^[1-3]

FTC-133人甲狀腺癌細胞系 是一種由扁平多邊形變?yōu)樗笮蔚募谞钕侔┘毎?。這些細胞保留了分化的甲狀腺細胞功能和甲狀腺細胞對甲狀腺素和局部活性生長因子的反應(yīng)。此外，甲狀腺球蛋白免疫反應(yīng)也可見于這種細胞系。

FTC-133人甲狀腺癌細胞系 是一種來源于人甲狀腺癌的腫瘤細胞系。這種細胞系已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于甲狀腺癌的研究中，包括腫瘤發(fā)生機制、藥物篩選和治療等方面。

FTC-133人甲狀腺癌細胞系通常通過將人甲狀腺癌組織中的腫瘤細胞分離出來，經(jīng)過體外培養(yǎng)和傳代，最終得到穩(wěn)定的細胞系。這些細胞具有多向分化潛能，可以分化為甲狀腺上皮細胞、濾泡細胞和髓樣細胞等不同類型的細胞。

由于FTC-133人甲狀腺癌細胞系具有高度的增殖能力和分化能力，因此被廣泛應(yīng)用于甲狀腺癌的研究中。

FTC-133人甲狀腺癌細胞系 

FTC-133人甲狀腺癌細胞系培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4.按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

3）FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入到凍存液中。

應(yīng)用^[4-5]

FTC-133人甲狀腺癌細胞系可以用于SLC27A2/FATP2在分化型甲狀腺癌增殖和遷移中的作用及機制研究

探討DUSP5介導FTC-133人甲狀腺癌細胞系遷移增殖作用人甲狀腺濾泡癌細胞系(FTC-133)分為以下4組:A:DUSP5過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染FTC-133(DUSP5);B:空載對照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染FTC-133(NC);C:DUSP5小干擾轉(zhuǎn)染FTC-133(siDUSP5);D:空載對照小干擾轉(zhuǎn)染FTC-133(siNC)。western blotting和qRT-PCR檢測DUSP5的干預(yù)效果。根據(jù)Transwell檢測細胞遷移、侵襲能力,EdU檢測細胞增殖能力,western blotting檢測遷移相關(guān)蛋白分子的表達情況。

KEGG富集分析明確FTC與PTC差異基因所富集關(guān)鍵通路并進行體外驗證進一步通過對三個數(shù)據(jù)集差異表達基因進行KEGG富集分析發(fā)現(xiàn),MAPK信號通路在三個數(shù)據(jù)集中均富集顯著,提示我們MAPK信號通路在介導FTC與PTC生物學行為差異方面發(fā)揮重要作用。我們分別應(yīng)用MAPK信號通路中三個亞通路的抑制劑以Edu、Transwell驗證三個亞通路(ERK MAPK,JNK,p3 8 MAPK)在FTC細胞中發(fā)揮的作用。進一步以western blotting檢測干預(yù)DUSP5的表達后MAPK信號通路的三個亞通路的激活情況,隨后Edu、Transwell明確DUSP5與其激活的MAPK亞通路對FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞增殖、遷移以及侵襲的影響。

統(tǒng)計學分析統(tǒng)計學分析:數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(mean±SE)表示,使用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,兩組間數(shù)據(jù)的比較使用非配對t檢驗。若P<0.05,則認為有統(tǒng)計學意義(雙側(cè)),若P<0.01,則認為有顯著統(tǒng)計學意義(雙側(cè))。

研究結(jié)果1.數(shù)據(jù)庫綜合分析結(jié)果:GEO數(shù)據(jù)庫篩選發(fā)現(xiàn)GSE27155,GSE53157和GSE29315三個數(shù)據(jù)集符合納入標準,共包含26個FTC樣本,67個PTC樣本,經(jīng)GEO2R工具進行差異表達基因分析并以Venn進行匯總(圖1.2),發(fā)現(xiàn)有26個基因(見表1)在這三個數(shù)據(jù)庫中均差異表達。這26個差異表達基因中有2個在FTC中表達上調(diào),24個表達下調(diào)(圖1.3)。對26個共同差異表達基因以cBioPartol數(shù)據(jù)庫中甲狀腺癌病人的臨床資料進行生存相關(guān)分析,我們發(fā)現(xiàn)這26個共同差異表達基因中DUSP5對于甲狀腺癌的生存率有明顯的影響(圖1.4)。

2. 驗證病理組織DUSP5的表達情況:免疫組化結(jié)果顯示,在FTC病理組織中DUSP5表達較少,而PTC病理組織中DUSP5大量表達(P<0.05)。在組織芯片中也得到相同的結(jié)果(P<0.05)。

3.細胞轉(zhuǎn)染DUSP5:轉(zhuǎn)染DUSP5過表達質(zhì)粒、小干擾以及對應(yīng)空白對照于FTC-133人甲狀腺癌細胞系細胞,western blottingting、RT-PCR驗證轉(zhuǎn)染效果,結(jié)果顯示:與空載對照質(zhì)粒組相比,過表達質(zhì)粒組DUSP5在蛋白水平和mRNA水平均表達增加(P<0.05),小干擾與對照組相比DUSP5表達降低(圖3.1)(P<0.05)。

參考文獻

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