背景[1-3]
人乳腺上皮細胞也稱為HMEC（Human Mammary Epithelial Cells），是從人乳腺組織中分離出來的貼壁細胞，呈多角形、圓形或短梭形。這些細胞是研究乳腺癌的重要模型，因為大多數(shù)乳腺癌病例都起源于乳腺上皮細胞。
人乳腺上皮細胞在培養(yǎng)過程中可以形成3D結構，這對于研究乳腺癌的發(fā)展和轉移非常重要。此外，這些細胞還可以用于篩選潛在的致癌物和抗癌藥物。
在研究中，人乳腺上皮細胞經(jīng)常與乳腺癌細胞系進行比較，以了解正常細胞和癌細胞之間的差異。這些差異可能包括基因表達、蛋白質(zhì)合成、代謝途徑和細胞信號傳導等方面的變化。
人乳腺上皮細胞可以分為兩種類型：良性和惡性。良性上皮細胞通常不會引起癌癥，而惡性上皮細胞則可能會發(fā)展成為乳腺癌。因此，研究人乳腺上皮細胞的生物學特性對于了解乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展過程非常重要。
人乳腺上皮細胞可以通過多種方法進行分離和培養(yǎng)，包括酶消化法、組織塊培養(yǎng)法和懸浮培養(yǎng)法等。這些方法的選擇取決于實驗的目的和所需的細胞類型。
人乳腺上皮細胞
人乳腺上皮細胞培養(yǎng)操作：
1)復蘇人乳腺上皮細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2)人乳腺上皮細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)人乳腺上皮細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
應用[4-5]
人乳腺上皮細胞可以用于成纖維細胞對乳腺上皮細胞生長分化的影響
通過人成纖維細胞與人乳腺癌細胞及人乳腺正常上皮細胞進行共培養(yǎng),模擬“種子”與“土壤”的腫瘤微環(huán)境,觀察間質(zhì)中主要成分成纖維細胞對腫瘤及上皮細胞生長與分化的影響,分析成纖維細胞生理生化的改變與乳腺癌發(fā)生發(fā)展和預后的關系,探討成纖維細胞相關生理生化改變作為腫瘤篩查、診斷及預后的生物標志物達到將腫瘤預防哨點監(jiān)測的“關口”前移的可行性。
方法(1)將人成纖維細胞(CCC-ESF-1)與乳腺癌細胞株(MDA-MB-231,MDA-MB-468)及人乳腺上皮細胞采用條件培養(yǎng)基法進行共培養(yǎng):a.當細胞生長匯合至大約80%時,棄去原有培養(yǎng)基,更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24h,離心后收集上清液分裝制成含5%胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)的條件培養(yǎng)基(Conditioned Medium,CM);b.按照此方法分別制成了CCC-ESF-1-CM、MDA-MB-231-CM、MDA-MB-468-CM、MCF10A-CM,即以成纖維細胞和乳腺正常細胞、癌細胞互相作為彼此的目的細胞與條件細胞;c.觀察比較細胞條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)前后的生長狀況,采用實時熒光定量PCR檢測成纖維細胞和乳腺正常細胞、癌細胞中EGFR m RNA的變化;Western Blot檢測EGFR、Vimentin、E-cadherin蛋白的表達變化,免疫細胞化學法檢測乳腺正常細胞、癌細胞中EGFR表達變化;
(2) 人乳腺癌組織芯片EGFR免疫組織化學染色,比較不同成纖維細胞間質(zhì)含量的組織中乳腺正常細胞、癌細胞EGFR表達情況,分析成纖維細胞對人乳腺上皮細胞生長分化的影響。結果1.與MDA-MB-231、MDA-MB-468及MCF10A條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)的CCC-ESF-1細胞中,EGFR m RNA與EGFR蛋白水平變化相比于單獨培養(yǎng)表達均上調(diào),分別增加30.75%(P<0.05)、7.20倍(P<0.05)和35.24倍(P<0.05);Vimentin表達均下調(diào),分別降低8.88%(P<0.05)、17.94%(P<0.05)和11.19%(P<0.05);E-cadherin表達上調(diào)分別增加2.61倍(P<0.05)、14.72倍(P<0.05)和1.56倍(P<0.05)。
2.與CCC-ESF1條件培養(yǎng)基共培養(yǎng)后,MDA-MB-231,MCF10A細胞EGFR m RNA和蛋白表達水平均下調(diào),相比于單獨培養(yǎng),分別降低98.83%(P<0.05)和59.98%(P<0.05);MDA-MB-468細胞EGFR m RNA和蛋白水平表達均上調(diào),蛋白表達增加4.79倍(P<0.05);MDA-MB-231,人乳腺上皮細胞Vimentin表達上調(diào),分別增加32.54%(P<0.05)和30.51%(P<0.05);MDA-MB-468細胞Vimentin表達下調(diào)62.43%(P<0.05)。MDA-MB-231細胞幾乎不表達E-cadherin,且與單獨培養(yǎng)相比差異不具有顯著性(下降13.42%,P>0.05);MDA-MB-468、MCF10A細胞E-cadherin表達均上調(diào),分別增加2.40倍(P<0.05)和15.33%(P<0.05)。3.人乳腺癌組織芯片分析檢測,遠癌(正常)組織中間質(zhì)含量越高,乳腺上皮細胞EGFR表達越強;在癌組織中,間質(zhì)含量過高或過低,乳腺腫瘤細胞EGFR均不表達。
參考文獻
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