NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1,TNFbeta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGFbeta前體。在博萊霉素刺激下，TGFbetamRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生達(dá)50%。即使達(dá)到0.001mg/mL的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性，此細(xì)胞懸浮-貼壁混合生長。

NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)

NR8383細(xì)胞來源于正常成年SD大鼠肺灌洗時的肺泡巨噬細(xì)胞，再通過有限稀釋從單個細(xì)胞亞克隆，最后從軟瓊脂亞克隆三次建立。NR8383細(xì)胞在Gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液里培養(yǎng)了8-9個月后，不再需要外源生長因子。NR8383細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性：吞噬酵母多糖和銅綠、非特異性脂酶活性、Fc受體、氧化降解；分泌IL-1、TNF-β和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TNF-β前體，在博萊霉素刺激下，TNF-β mRNA表達(dá)也上升。NR8383細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感，1-10ng/mL的LPS抑制增殖達(dá)50%；即使達(dá)到10ng/mL的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。NR8383細(xì)胞是一種高響應(yīng)的均一來源肺泡巨噬細(xì)胞模型，可以用于體外研究巨噬細(xì)胞相關(guān)活性，此細(xì)胞懸浮-貼壁混合生長。肺；巨噬細(xì)胞；肺泡巨噬細(xì)胞樣(圓形為主，懸浮或附著瓶底)NR8383來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細(xì)胞。細(xì)胞在gerbil肺細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了大約8-9個月。隨后，不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法從單個細(xì)胞克隆并亞克隆NR8383細(xì)胞，并三次用軟瓊脂亞克隆。細(xì)胞表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞的特性，吞噬酵母多糖和銅綠，非特異性脂酶活性，F(xiàn)c受體，氧化降解；分泌IL-1, TNF beta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細(xì)胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF beta前體。在博萊霉素刺激下，TGF beta mRNA表達(dá)也上升。細(xì)胞對內(nèi)毒素敏感。1-10ng/mL的LPS水平抑制增生達(dá)50%。 即使達(dá)到0.001mg/mL的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。 NR8383細(xì)胞株提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細(xì)胞的均一來源，可以用于體外研究巨響細(xì)胞相關(guān)活性。1.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；2.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；3.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。也可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

貼壁和懸浮混合；巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞；自發(fā)永生；SD大鼠；成年NR8383(大鼠肺泡巨噬細(xì)胞)“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中，細(xì)胞培增3～6次。細(xì)胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進(jìn)行各種試驗。懸浮細(xì)胞