酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定
雙抗夾心法
血清、血漿、組織、細(xì)胞上清或其他生物樣本
該試劑盒采用“一步”夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞或其他相關(guān)生物液體中IgG2a濃度。
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體,將未結(jié)合的抗體洗凈后再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。
可檢測(cè)樣本中的IgG2a,且與其它類似物無(wú)明顯交叉反應(yīng)。
IgG 是血清中五類哺乳動(dòng)物免疫球蛋白中最豐富的一種。IgG 分子(約 150 kDa)由兩條約 50 kDa 的重鏈和兩條 25 kDa 的輕鏈組成,通過(guò)二硫鍵連接。抗體的特異性是由可變區(qū)域內(nèi)的體細(xì)胞重排和超突變共同賦予的。小鼠 IgG 同型 IgG1、IgG2a 和 IgG2b 在重鏈恒定區(qū)域(CH1、CH2 和 CH3)內(nèi)有大約 64-78%的氨基酸序列相同,并且在與補(bǔ)體、NK 和肥大細(xì)胞的相互作用、特定細(xì)胞因子的誘導(dǎo)或抑制以及穿過(guò)胎盤的能力方面可能有所不同。