單細胞全基因組擴增試劑盒
| 中文名稱 | 單細胞全基因組擴增試劑盒 |
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| 中文同義詞 | 單細胞全基因組擴增試劑盒 |
| 英文名稱 | Single cell whole genome amplification kit |
| 英文同義詞 | |
| CAS號 | |
| 分子式 | |
| 分子量 | 0 |
| EINECS號 | |
| 相關類別 | |
| Mol文件 | Mol File |
| 結構式 |
單細胞全基因組擴增試劑盒 性質
單細胞全基因組擴增試劑盒基于多重鏈置換擴增的Phi29 DNA聚合酶等溫擴增體系，Phi29 DNA聚合酶是從Bacillus subtilis噬菌體Phi29中克隆出的嗜溫DNA聚合酶，利用基因重組技術，在大腸桿菌中進行表達后經多次純化分離而得。Phi29 DNA聚合酶具有很強的鏈置換活性，可實現(xiàn)對DNA復雜結構的解鏈與復制。同時具有高效的DNA合成能力，可連續(xù)合成多達70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很強的3’→5’外切酶活性，保真度高于絕大多數(shù)高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特別適合用于全基因組擴增。
單細胞全基因組擴增
本試劑盒可以實現(xiàn)單個細胞或者少量樣本的全基因組無差別擴增，一個反應可以達到40ug的全基因組DNA。低質量樣品會影響DNA的最終產量，如果以DNA樣品為模板，需避免使用降解的DNA作為起始模板。
適用于以1-1000個新鮮配制的細胞樣品作為模板，以保證起始基因組的完整性。1、將細胞用PBS洗滌三次。
2、取一倍體積的細胞，加入一倍體積的Cell Lysis Buffer，輕輕混勻（勿渦旋混勻）后置于冰上放置10min。
3、加入一倍體積的Neutralization Buffer，輕輕混勻，勿渦旋混勻。
4、從上述混合液中取3μL樣品，加入7μL無菌水，10μL Reaction Buffer。將20uL上述處理后的樣品加入到25uL GenoPhi29 Buffer中。
注意：如果不進行后續(xù)反應，需冰上放置。
5、加入5μL GenoPhi29 Enzyme，30℃反應3h。
注意：65℃，10min失活Phi29 DNA聚合酶。
6、擴增產物是高濃度基因組DNA，需要將擴增產物用無菌水或者TE緩沖液進行稀釋后進行下游實驗。