阿立塞替 (代號 MLN8237)是由千禧制藥（Millennium)和武田制藥（Takeda)聯(lián)合研發(fā)的一種多靶點小分子化合物。阿立塞替（Alisertib)是一種極光激酶 (Aurora A)、細(xì)胞周期和有絲分裂抑制劑?？茖W(xué)研宄表明阿立塞替沒有常規(guī)化療藥物那樣巨大的副作用，是一個更溫和的抗癌藥物。這是因為該化合物專門針對一個關(guān)鍵酶，避免了損傷骨髓和血液中的健康細(xì)胞，并且可能會在更低劑量的情況下比之前研宄測試的藥物更有效。Alisertib (MLN8237)是一種選擇性的Aurora A抑制劑，IC50為1.2 nM，作用于Aurora A比作用于Aurora B選擇性強(qiáng)200倍以上。Phase 3。MLN8237作用于Aurora A選擇性比作用于結(jié)構(gòu)相關(guān)的Aurora B 高200多倍，IC50為396.5 nM, 而對205種其他激酶則沒有顯著活性。 0.5 μM MLN8237處理MM1.S和 OPM1 細(xì)胞，抑制 Aurora A磷酸化，而不影響 Aurora B調(diào)節(jié)的組蛋白H3磷酸化。MLN8237作用于多發(fā)性骨髓瘤(MM) 細(xì)胞系，顯著抑制細(xì)胞增殖，IC50為0.003-1.71 μM。在BM 基質(zhì)細(xì)胞，IL-6和 IGF-1 存在時，MLN8237作用于原代MM 細(xì)胞和MM細(xì)胞系，抗增殖活性比只有MLN8237單獨作用時高很多。0.5 μM MLN8237 作用于原代MM細(xì)胞和細(xì)胞系，使G2/M 期細(xì)胞提高2到6倍，且顯著誘導(dǎo)凋亡和衰老，涉及p53, p21 和p27的上調(diào),及 PARP,caspase 3,和 caspase 9的裂解。此外, MLN8237和 Dexamethasone聯(lián)用具有協(xié)同作用，具有強(qiáng)抗MM 功效, 而和Doxorubicin 及Bortezomib聯(lián)用則具有另外的功能。 0.5 μM MLN8237處理 FLO-1, OE19, 和OE33 食管腺癌細(xì)胞系，抑制集落形成，且顯著提高多倍體細(xì)胞百分?jǐn)?shù),隨后提高G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù),而與 Cisplatin (2.5 μM)聯(lián)用則效果進(jìn)一步提高，與單獨用藥相比，誘導(dǎo)產(chǎn)生更多, TAp73β, PUMA, NOXA, cleaved caspase-3, 和cleaved PARP。MLN8237口服處理，顯著降低腫瘤負(fù)擔(dān)，按15 mg/kg 和30 mg/kg劑量處理腫瘤生長抑制率(TGI) 分別為42%和80%,且與對照組相比，延遲小鼠壽命。 MLN8237 (30 mg/kg) 與Cisplatin (2 mg/kg) 聯(lián)用作用于FLO-1移植瘤，與單獨用藥相比，抗癌活性增強(qiáng)，伴隨著Ki-67表達(dá)受抑制，細(xì)胞核p73蛋白和cleaved caspase 3表達(dá)增強(qiáng)。MLN8237 是第一個口服有效的小分子Aurora A激酶選擇性抑制劑。Alisertib (MLN8237)是一種選擇性Aurora A抑制劑，無細(xì)胞試驗中IC50為1.2 nM，作用于Aurora A比作用于Aurora B選擇性強(qiáng)200倍以上。Alisertib 可誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡與自噬。Phase 3。

Target	Value
Aurora A (Cell-free assay)	1.2 nM

MLN8237作用于Aurora A選擇性比作用于結(jié)構(gòu)相關(guān)的Aurora B 高200多倍，IC50為396.5 nM, 而對205種其他激酶則沒有顯著活性。 0.5 μM MLN8237處理MM1.S和 OPM1 細(xì)胞，抑制 Aurora A磷酸化，而不影響 Aurora B調(diào)節(jié)的組蛋白H3磷酸化。MLN8237作用于多發(fā)性骨髓瘤(MM) 細(xì)胞系，顯著抑制細(xì)胞增殖，IC50為0.003-1.71 μM。在BM 基質(zhì)細(xì)胞，IL-6和 IGF-1 存在時，MLN8237作用于原代MM 細(xì)胞和MM細(xì)胞系，抗增殖活性比只有MLN8237單獨作用時高很多。0.5 μM MLN8237 作用于原代MM細(xì)胞和細(xì)胞系，使G2/M 期細(xì)胞提高2到6倍，且顯著誘導(dǎo)凋亡和衰老，涉及p53, p21 和p27的上調(diào),及 PARP,caspase 3,和 caspase 9的裂解。此外, MLN8237和 Dexamethasone聯(lián)用具有協(xié)同作用，具有強(qiáng)抗MM 功效, 而和Doxorubicin 及Bortezomib聯(lián)用則具有另外的功能。 0.5 μM MLN8237處理 FLO-1, OE19, 和OE33 食管腺癌細(xì)胞系，抑制集落形成，且顯著提高多倍體細(xì)胞百分?jǐn)?shù),隨后提高G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù),而與 Cisplatin (2.5 μM)聯(lián)用則效果進(jìn)一步提高，與單獨用藥相比，誘導(dǎo)產(chǎn)生更多, TAp73β, PUMA, NOXA, cleaved caspase-3, 和cleaved PARP。

MLN8237口服處理，顯著降低腫瘤負(fù)擔(dān)，按15 mg/kg 和30 mg/kg劑量處理腫瘤生長抑制率(TGI) 分別為42%和80%,且與對照組相比，延遲小鼠壽命。 MLN8237 (30 mg/kg) 與Cisplatin (2 mg/kg) 聯(lián)用作用于FLO-1移植瘤，與單獨用藥相比，抗癌活性增強(qiáng)，伴隨著Ki-67表達(dá)受抑制，細(xì)胞核p73蛋白和cleaved caspase 3表達(dá)增強(qiáng)。

以化合物（CAS:1028486-08-9）和8-氯-4-[(二甲基氨基)亞甲基]-1-(2-氟-6-甲氧基苯基)-3,4-二氫-5H-2-苯并氮雜卓-5-酮為原料，合成4-((9-氯-7-(2-氟-6-甲氧基苯基)-5H-苯并[c]嘧啶并[5,4-d]氮雜卓-2-基)氨基)-2-甲氧基苯甲酸的一般步驟如下： 1. 在反應(yīng)器中加入化合物6（3.81 kg，15.5 mol）、碳酸鉀（4.3 kg，31.1 mol）、化合物9（5.27 kg，14.1 mol）和甲醇（63 L）。 2. 將懸浮液加熱至50至55℃，并持續(xù)攪拌至少24小時，直至通過HPLC分析確認(rèn)轉(zhuǎn)化率>96.0%。 3. 在保持溫度在50至55℃之間的條件下，加入甲醇（10 L）和水（37 L）。 4. 使用7% w/w的HCl溶液（由7.0 kg濃HCl和24 L水配制）調(diào)節(jié)混合物的pH至3.0至4.0，同時維持溫度在50至55℃之間。 5. 將懸浮液在至少1小時內(nèi)冷卻至20至25℃，并繼續(xù)攪拌至少60分鐘。 6. 過濾所得懸浮液，依次用50至55℃的水（2×26.3 L）和20至25℃的甲醇（2×10 L）洗滌濾餅。 7. 將濕濾餅在45至50℃下進(jìn)行真空干燥，得到5.85 kg（收率80%）的目標(biāo)產(chǎn)物式(II)。 產(chǎn)物表征數(shù)據(jù)： 3/4 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12.07 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.29 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.80 (dd, J = 2.4, 8.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.39 (m, 3H), 7.21 (s, 1H), 6.89 (s, 2H), 3.82 (s, 6H); MS (ESI) m/z 517.2 (M-H+, 45%)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Patent: WO2011/103089, 2011, A1. Location in patent: Page/Page column 45