酶聯(lián)免疫吸附測定
雙抗夾心法
血清、血漿、組織、細(xì)胞上清或其他生物樣本
該試劑盒采用“一步”夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞或其他相關(guān)生物液體中IL-13濃度。
將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合,然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體,將未結(jié)合的抗體洗凈后再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。
可檢測樣本中的IL-13,且與其它類似物無明顯交叉反應(yīng)。
白細(xì)胞介素 13 是一類可廣泛抑制單核巨噬細(xì)胞單核炎癥因子產(chǎn)生, 具有抗炎及抗腫瘤作用的新型多效性細(xì)胞因子, 在生物學(xué)功能上與 IL-4 有許多相似之處, 并主要由活化 T 細(xì)胞合成和分泌。人 IL -13 (hIL-13, human IL-13) 基因組全長 4. 6kb, 由 4 個外顯子和 3 個內(nèi) 含子組成, 染色體定位于 5q31, 與其他免疫造血因子( IL- 3、IL- 4、 IL- 5、GM -CSF) 位于同一基因簇, 并與 IL -4 最近(2.4kb)。hIL-13 全長 cDNA 約 1. 3 kb, 編碼由 132 個氨基酸構(gòu)成的多肽蛋白, 成熟 蛋白起始于 Gly21, 其非糖基化重組單體活性蛋白分子量約為 10kDa。IL-13 的生物學(xué)活性包括趨化單核細(xì)胞,延長單核細(xì)胞在體 外存活時(shí)間,抑制 LPS 誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞 IL-1、IL-6、IL-8 和 TNF-α等炎癥因子產(chǎn)生。協(xié)同抗 IgM 活化 B 細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)和上 調(diào) B 細(xì)胞 MHCⅡ類抗原、CD23 和 CD72 的表達(dá), 誘導(dǎo) B 細(xì)胞產(chǎn) 生 IgM、IgG 和 IgE。誘導(dǎo)大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)產(chǎn)生 IFN-γ,并可與 IL-2 協(xié)同刺激 LGL 產(chǎn)生 IFN-γ,因而在誘導(dǎo) LAK 活性以及 Th1 型細(xì) 胞免疫中可能有重要作用。