線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶(mt-GPD)活性試劑盒微板法/96樣
產(chǎn)品簡介：
線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mt-GPD）存在于線粒體中，在 3-磷酸甘油途徑中起重要作用 ，催化底物 3-磷酸甘油生成磷酸二羥丙酮，同時生成的電子和氫進入呼吸鏈參與氧化磷酸化；在電子傳遞體（PMS）存在下，使噻唑藍（MTT）還原生成藍色產(chǎn)物，通過檢測該藍色產(chǎn)物在 550nm 處的增加速率，即可得出 mt-GPD 活性大小。
試劑盒組成和配制：
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存要求 | 備注 |
試劑一 | 液體100mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑二 | 液體20mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑三 | 液體0.2mL×1瓶 | 4℃保存 |
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試劑四 | 粉劑 mg×2支 | -4℃保存 | 用前甩幾下使試劑落入底部，每支加 0.6mL的蒸餾水溶解。一周內(nèi)用完。 |
試劑五 | 粉劑 mg×4 支 | -20℃保存 | 用前甩幾下使試劑落入底部，每支加 0.3mL的蒸餾水溶解。一天內(nèi)用完。 |
試劑六 | 液體 17mL×1 瓶 | 4℃保存 |
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試劑七 | 粉劑 mg×1 支 | 4℃保存 | 用前甩幾下使試劑落入底部，臨用前加1.1mL 蒸餾水溶解。
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所需的儀器和用品：
酶標儀、96 孔板、可調(diào)試移液器、臺式離心機、水浴鍋、研缽、冰和蒸餾水。
線粒體-3-磷酸甘油脫氫酶（mtGPD）活性測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！
樣本制備：
線粒體制備（提示：整個線粒體的提取過程須保持 4℃低溫環(huán)境）：
① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細菌/細胞，加入 1mL 試劑一，用冰浴勻漿器或研缽氮研磨。 勻漿，轉移至離心管后于 4℃×700g 離心 10min。
② 棄沉淀，上清液移至另一離心管中，4℃×12000g 離心 10min。用移液器移除上清液(上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的酶活性（此步可選做）)，留下沉淀（沉淀即為線粒體）。
③ 在沉淀（線粒體）中加入 200μL 試劑二和 2μL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或先收集細菌/真菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取 500 萬細菌/真菌加入1mL 提取液；冰
浴超聲波破碎細菌/真菌（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；12000rpm， 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
[注]：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10 的比例進行提取，或按照細菌/細胞數(shù)量（104）：提取液（mL）為 500~1000： 1 的比例進行提取。
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