1469541-54-5
中文名稱
Cy7.5-琥珀酰亞胺/活化酯
英文名稱
Cyanine7.5 NHS ester
CAS
1469541-54-5
分子式
C49H52N3O4+
分子量
746.97
MOL 文件
1469541-54-5.mol
1469541-54-5 結(jié)構(gòu)式
物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀外觀 : 綠色固體
ex/em : 784/814nm(MeOH/PBS緩沖液)
消光系數(shù)(ε) : 223000 L?mol?1?cm?1
量子產(chǎn)率(Φ) : 0.10
ex/em : 784/814nm(MeOH/PBS緩沖液)
消光系數(shù)(ε) : 223000 L?mol?1?cm?1
量子產(chǎn)率(Φ) : 0.10
溶解度可溶于DMF等有機(jī)溶劑
外觀Green solid
ε(消光系數(shù))223000 L?mol?1?cm?1
Φ(量子產(chǎn)率)0.10
激發(fā)峰(Ex)/發(fā)射峰(Em)784/814nm (MeOH/PBS buffer)
常見問題列表
熒光標(biāo)記染料
Cy7.5 (Cyanine 7.5) 是一種發(fā)近紅外（NIR）熒光的花青素?zé)晒馊玖稀y7.5的熒光波長很長，發(fā)射峰（Em max）大于800nm，恰好處于肌體組織近紅外窗口 I 的區(qū)域（肌體的血液，體液和組織此區(qū)域背景熒光弱，而長波長穿透性強(qiáng)），所以Cy7.5的標(biāo)記物常應(yīng)用于小動物活體體內(nèi)成像中。Cy7.5可以用來標(biāo)記蛋白，抗體，多肽等。另外，由于近紅外熒光背景低，Cy7.5標(biāo)記的二抗常常用于熒光蛋白免疫印跡(Western Blot)。NHS活化酯 （N-羥基琥珀酰亞胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester）是生物標(biāo)記反應(yīng)中最常用的活化基團(tuán)。它活化Cy7.5分子中的羧基，讓它可以和目標(biāo)生物分子上的胺基（伯胺或者仲胺）反應(yīng)生成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而把Cy7.5分子標(biāo)記到生物大分子上。由于游離胺基是蛋白，抗體，多肽表面的常見官能團(tuán)（來自于賴胺酸側(cè)鏈），Cy7.5-NHS可以和它們直接反應(yīng)。核酸分子中天然不帶游離胺基，只有胺基修飾過的RNA或者DNA才可以和Cy7.5-NHS反應(yīng)。
Cy7.5-NHS活化酯的水溶性較低，所以在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等。如需標(biāo)記的分子對有機(jī)溶劑敏感，可選擇磺化花青素（sulfonated cyanine），即sulfo-Cy7.5-NHS活化酯。兩者的光譜性質(zhì)幾乎一致，因此大部分應(yīng)用可相互替換。兩者的主要區(qū)別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)不需要使用有機(jī)共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強(qiáng)標(biāo)記效率。
Cy7.5-NHS標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是784/814nm。和它具有相似熒光特性的染料包括Alexa Fluor 790，DyLight 800，吲哚菁綠(indocyanine green, ICG)等。
注意事項(xiàng)
- NHS ester基團(tuán)對濕度比較敏感，務(wù)必干燥保存產(chǎn)品。使用前產(chǎn)品需放到室溫回溫至少20分鐘。
- 使用不含氨基的緩沖體系。比如磷酸鈉緩沖液（PBS），Hepes緩沖液，碳酸氫鈉緩沖液，或硼酸緩沖液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的緩沖液，比如Tris，甘氨酸等。高濃度咪唑(imidazole)也會影響反應(yīng)。
- 標(biāo)記反應(yīng)不要放在強(qiáng)光下，因?yàn)榇蟛糠譄晒饣衔镌趶?qiáng)光下長時間照射會緩慢光漂泊。