407627-68-3
中文名稱
AF555 NHS 活化酯
英文名稱
AF555 NHS activated ester
CAS
407627-68-3
更新日期
2026/06/20 09:24:22
物理化學(xué)性質(zhì)
外觀性狀外觀 : 紅色固體
ex/em : 556/571 nm
消光系數(shù)(ε) : 155,000 L?mol?1?cm?1
量子產(chǎn)率(Φ) : 0.1
ex/em : 556/571 nm
消光系數(shù)(ε) : 155,000 L?mol?1?cm?1
量子產(chǎn)率(Φ) : 0.1
溶解度易溶于水, DMSO, DMF等
外觀Red solid
ε(消光系數(shù))155,000 L?mol?1?cm?1
Φ(量子產(chǎn)率)0.1
激發(fā)峰(Ex)/發(fā)射峰(Em)556/571 nm
常見問題列表
熒光標(biāo)記染料
AF555，即Alexa Flour 555，是Alexa Fluor家族中的一種橘黃色-橙紅色熒光染料，是Sulfo-Cy3的類似物，常用于代替Cy3、TAMRA染料使用。AF555染料的激發(fā)譜和發(fā)射譜具有較好的對稱性，并且都有非常典型的肩峰，激發(fā)譜的肩峰巧合處于532nm激光束附近，在共聚焦實驗中常常被用于激發(fā)AF555染料。AF555染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰譜帶恰好處于黃色光與紅色光過度區(qū)域，因此，激發(fā)光往往呈黃色或者黃綠色，發(fā)射出來的熒光為黃紅色（橙紅色），這種熒光色彩和AF488的綠色熒光一樣，都是人肉眼非常敏感的彩色光，在熒光顯微鏡下很容易辨認(rèn)出來。AF555染料的極性很大，水溶性極強(qiáng)，熒光亮度和熒光穩(wěn)定性也極好，是蛋白/抗體標(biāo)記的良好染料。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，AF555的母核是花青素Cy3，但是母核上帶有多達(dá)4個磺酸根基團(tuán)，相對于二磺酸的sulfo-Cy3，足足多了一倍。 AF555染料的四磺酸結(jié)構(gòu)讓其具有極度親水性，染料標(biāo)記到蛋白表面后，不會改變蛋白表面極性，降低了蛋白疏水化聚集沉淀的風(fēng)險；磺酸根帶有多電荷，這讓蛋白表面標(biāo)記的多個AF555分子間互相電荷排斥，極大降低了染料局部靠近而熒光淬滅的概率，因此AF555標(biāo)記后的蛋白往往發(fā)出更強(qiáng)的熒光，亮度比sulfo-Cy3標(biāo)記的樣品要強(qiáng)20%以上。
NHS活化酯(N-羥基琥珀酰亞胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester, SE)是生物標(biāo)記反應(yīng)中最常用的活化基團(tuán)。NHS活化AF555分子中的羧基，讓它可以和目標(biāo)生物分子上的胺基（主要伯胺）反應(yīng)生成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而把AF555熒光分子標(biāo)記到生物大分子上。所得 Alexa Fluor 偶聯(lián)物將顯示出比其他光譜相似熒光基團(tuán)的偶聯(lián)物更亮的熒光和更高的光穩(wěn)定性。