人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA KIT性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝

檢測(cè)類型

雙抗體夾心法

用途

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)的含量。

種屬

人

檢測(cè)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)水平。用純化的甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)，再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)含量。 ?

樣本

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 ?

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。 4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。 5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。 8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 9. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 ? ?

特異性

可檢測(cè)樣本中人的TBG，且與其類似物無明顯交叉反應(yīng)。

背景信息

甲狀腺結(jié)合球蛋白（TBG）是一種球蛋白，由SERPINA7基因編碼。它在循環(huán)中結(jié)合甲狀腺激素。它是三種運(yùn)輸?shù)鞍祝ㄒ约稗D(zhuǎn)甲狀腺素和血清白蛋白）之一，負(fù)責(zé)在血液中攜帶甲狀腺激素甲狀腺素（T4）和三碘甲狀腺原氨酸（T3）。在這三種蛋白質(zhì)中，它對(duì)T4和T3具有最高的親和力，但相對(duì)于轉(zhuǎn)甲狀腺素和白蛋白的濃度最低，后者在循環(huán)中也結(jié)合T3和T4。盡管濃度低，但TBG攜帶血漿中的大部分T4。由于血液中T4和T3的濃度非常低，TBG的配體飽和度很少超過25%。與轉(zhuǎn)甲狀腺素和白蛋白不同，它對(duì)T4/T3具有單一結(jié)合位點(diǎn)。它主要在肝臟中合成為54-kDa蛋白。在基因組學(xué)方面，它是一種serpin；然而，它不像這類蛋白質(zhì)的許多其他成員那樣具有抑制功能。

人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA KIT 上下游產(chǎn)品信息

上游原料

下游產(chǎn)品

人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA KIT 生產(chǎn)廠家

 

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