小鼠腦膜細(xì)胞性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
小鼠腦膜細(xì)胞是分離自小鼠腦膜組織采用胰蛋白酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，分離的小鼠腦膜細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
腦膜是緊貼腦表面和腦室內(nèi)面的一層透明薄膜，內(nèi)含豐富的血管。在腦室與室管膜上皮共同形成脈絡(luò)叢產(chǎn)生腦脊液。腦膜的病變導(dǎo)致腦脊液動(dòng)力學(xué)改變，從而形成腦脊液壓力增高，最終導(dǎo)致腦積水。目前關(guān)于腦積水的發(fā)病機(jī)制，研究認(rèn)為腦脊液循環(huán)障礙可能與腦膜纖維化密切相關(guān)。腦膜細(xì)胞是組成腦膜纖維化的主要細(xì)胞
1.取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2.貼壁細(xì)胞消化
1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化；
3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀(guān)察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
1)組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常腦組織。
2)細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
1:2傳代
兔
腦膜組織
小鼠腦膜細(xì)胞采用胰蛋白酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)。
貼壁生長(zhǎng)
梭形細(xì)胞樣，不規(guī)則細(xì)胞樣
小鼠腦膜細(xì)胞
上下游產(chǎn)品信息
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