人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA KIT性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝

檢測類型

雙抗體夾心法

用途

本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)的含量。

種屬

人

檢測原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)水平。用純化的基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)含量。 ?

樣本

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 ?

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。 2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。 4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。 5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。 8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 ? ?

特異性

可檢測樣本中人的MMP-13，且與其類似物無明顯交叉反應(yīng)。

背景信息

基質(zhì)金屬蛋白酶13（MMP-13）由MMP13基因編碼的酶，它是基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）家族的成員。像大多數(shù)MMPs一樣，它以無活性的原形分泌。MMP-13的預(yù)測分子量約為54kDa。它在骨骼中表達(dá)，是重組膠原基質(zhì)以實現(xiàn)骨礦化的需要。該基因編碼的蛋白比I型和III型膠原蛋白更有效地裂解II型膠原蛋白，它可能參與了與骨關(guān)節(jié)炎有關(guān)的關(guān)節(jié)軟骨周轉(zhuǎn)和軟骨病理生理學(xué)，該基因是定位于染色體11q22.3的MMP基因組的一部分。MMP-13有幾個與各種轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合域，包括AP-1、PEA-3和OSE-2，以及一個與TGF-β抑制因子（TIE）同源的序列。

人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA KIT 上下游產(chǎn)品信息

上游原料

下游產(chǎn)品

人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA KIT 生產(chǎn)廠家

 

人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA KIT 相關(guān)搜索:

• Elisa Kit-Human Elisa Kit
• ELISA
• ELISA試劑盒-人elisa試劑盒
• 人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA檢測試劑盒
• 人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)酶聯(lián)免疫試劑盒
• MMP-13檢測試劑盒
• 人MMP-13酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
• 人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA KIT
• Human Matrix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit