TRIZOL(總RNA提取試劑)
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- CAS號:
- 英文名:
- TRIZOL (Total RNA Extraction Reagent)
- 英文別名:
- 中文名:
- TRIZOL(總RNA提取試劑)
- 中文別名:
- TRIZOL(總RNA提取試劑)
- CBNumber:
- CB73061322
- 分子式:
- 分子量:
- 0
- MOL File:
- Mol file
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TRIZOL(總RNA提取試劑)化學性質(zhì)
TRIZOL(總RNA提取試劑)性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝
Trizol(總RNA提取試劑)是一種廣泛適用于多種樣品總RNA提取的試劑，例如人、動物、植物和細菌、血液等。一般提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，常用于RT-qPCR、mRNA純化等實驗。
Trizol試劑中的異硫氰酸胍是一種強力的蛋白質(zhì)變性劑，它能迅速破壞細胞結(jié)構(gòu)，使細胞內(nèi)的核酸和蛋白質(zhì)釋放出來。同時，異硫氰酸胍還能有效抑制細胞釋放出的核酸酶活性，保護RNA不被降解。在細胞裂解后，加入氯仿進行離心。氯仿的密度大于水，且能與苯酚結(jié)合，從而抽提酸性的苯酚。苯酚的存在促使RNA進入水相，而大部分DNA和蛋白質(zhì)則保留在中間相或下層有機相中。通過離心，可以實現(xiàn)RNA與其他細胞成分的分離。收集上層水相后，加入異丙醇以沉淀RNA。異丙醇的-OH基團為親水基團，能與水結(jié)合，從而使RNA脫水并產(chǎn)生沉淀。使用乙醇洗滌RNA沉淀，以去除殘留的異丙醇和其他有機溶劑，同時去除RNA表面吸附的少量雜質(zhì)。洗滌后，RNA沉淀被干燥并用無RNase的水溶解，得到純凈的總RNA。
TRIZOL(總RNA提取試劑)主要由異硫氰酸胍、苯酚、8-羥基喹啉、β-巰基乙醇等成分組成。
①異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一種強力的蛋白質(zhì)變性劑，能迅速溶解蛋白質(zhì)，使蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)消失，細胞結(jié)構(gòu)降解，從而使核蛋白與核酸解聚，將RNA釋放到溶液中。同時，它還能有效抑制細胞釋放出的核酸酶活性，保護RNA的完整性。
②苯酚的主要作用是使蛋白質(zhì)變性并沉淀，同時溶解脂質(zhì)；與后續(xù)加入的氯仿配合，形成密度梯度，實現(xiàn)RNA (上層水相) 與蛋白，雜質(zhì)(下層有機相)的物理分離。
③8-羥基喹啉可以抑制RNase活性，與氯仿聯(lián)合使用時可顯著增強對內(nèi)源性和外源性RNase的抑制作用。
④β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵，從而進一步抑制RNase活性。
TRIZOL(總RNA提取試劑)
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