HBE135-E6E7性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝

細(xì)胞簡(jiǎn)介

HBE135-E6E7細(xì)胞分離于一位接受肺葉切除術(shù)的鱗狀細(xì)胞癌男性患者的正常支氣管上皮，并用含有人乳頭瘤病毒(HPV) E6E7基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒LXSN16E6E7感染細(xì)胞并通過(guò)0.4 mg/mL G418篩選構(gòu)建而成。

來(lái)源

HBE135-E6E7細(xì)胞系是一種人支氣管上皮細(xì)胞系，源自一位54歲男性的正常支氣管上皮細(xì)胞，該男性因鱗狀細(xì)胞癌接受了肺葉切除手術(shù)。

細(xì)胞特性

永生化機(jī)制：通過(guò)攜帶人乳頭瘤病毒（HPV）E6和E7基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒（LXSN16E6E7）感染原代細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的永生化。

基因表達(dá)：表達(dá)高水平的表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α（TGF-α）和雙調(diào)蛋白（AR）mRNA，但不表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子（EGF）。

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣，呈貼壁生長(zhǎng)

生長(zhǎng)特性

在體外可持續(xù)增殖，適合長(zhǎng)期培養(yǎng)

傳代方法

1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞10-20s，吸走潤(rùn)洗的PBS；3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細(xì)胞層；4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；5.消化到細(xì)胞間隙變大，但未完全脫落時(shí)加2-3ml完全培養(yǎng)基終止胰酶消化；6.混勻細(xì)胞，900rpm離心3-5min，棄上清；7.加新的完全培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；8.補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

傳代比例

1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

細(xì)胞傳代

• 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)，即可傳代。

• 吸去培養(yǎng)液，加入不含鈣鎂的PBS輕輕潤(rùn)洗瓶底1-2次，吸棄PBS。

• 加入0.25%胰酶-EDTA消化液，鋪勻瓶底放入培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘。

• 消化后，加入預(yù)溫的培養(yǎng)基終止消化，輕柔吹打使細(xì)胞脫離基質(zhì)。

• 按1:2至1:4的比例將細(xì)胞懸液均勻分配到新的培養(yǎng)器皿中，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

種屬

人源（Homo sapiens）

組織來(lái)源

肺/支氣管（Lung/bronchus）

年齡

54歲（54 years）

細(xì)胞類(lèi)型

轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

疾病

癌癥（Carcinoma）

HBE135-E6E7 上下游產(chǎn)品信息

上游原料

下游產(chǎn)品

HBE135-E6E7 生產(chǎn)廠家

 

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