骨組織RNA提取試劑盒性質(zhì)、用途與生產(chǎn)工藝

提取方法

骨組織堅(jiān)硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和RNA難以分離，無法用傳統(tǒng)SparkZol法進(jìn)行高質(zhì)量提取。骨組織RNA提取試劑盒采用獨(dú)有的不含苯酚/氯仿配方的裂解液，并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時基因組DNA清除柱可以有效清除gDNA殘留，得到的RNA一般不需要DNase消化，可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，離心沉淀去除多糖和次級代謝產(chǎn)物，裂解混合物用乙醇調(diào)節(jié)RNA結(jié)合吸附到基因組DNA清除柱，然后RNA被選擇性洗脫濾過。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后，RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的去蛋白、漂洗的步驟將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的RNase Free H2O將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

注意事項(xiàng)

• 樣品處理量絕對不要超過基因組DNA清除柱和RNA吸附柱RA處理能力，否則造成DNA殘留或產(chǎn)量降低。開始摸索實(shí)驗(yàn)條件時，如果不清楚樣品DNA/RNA含量時可使用較少的樣品處理量，再根據(jù)樣品試驗(yàn)情況增加或者減少處理量。
• 裂解液CLB和RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
• 取1 mL裂解液CLB至離心管內(nèi)（如果CLB有析出或者沉淀需先置于65℃水浴重新溶解），在裂解液CLB中加入100 μL PLANTspark，顛倒混勻后65℃水浴中預(yù)熱。多個樣品按照比例放大準(zhǔn)備。
• 所有離心操作步驟，均在室溫（15-25 ℃）下進(jìn)行。

骨組織RNA提取試劑盒 上下游產(chǎn)品信息

上游原料

下游產(chǎn)品

骨組織RNA提取試劑盒 生產(chǎn)廠家

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