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MS基本培養(yǎng)基的應(yīng)用

2020/2/21 15:30:40

背景及概述[1][2]

MS基本培養(yǎng)基是只含有無機(jī)鹽、蔗糖、維生素和水等最基本成分的合成培養(yǎng)基。如Ms、White、Nitsch、N6等培養(yǎng)基。菊葉薯蕷選用MS基本培養(yǎng)基,它的顯著特點(diǎn)是含有很高的氮、鉀,尤其是硝酸鹽的用量很大,同時含有的銨鹽,使它營養(yǎng)豐富,能支持培養(yǎng)物快速生長,當(dāng)培養(yǎng)物久不轉(zhuǎn)接時仍可維持其生存。

應(yīng)用[3-6]

MS基本培養(yǎng)基對篩選營養(yǎng)缺陷型微生物和進(jìn)行遺傳、育種等研究工作十分重要,其應(yīng)用舉例如下:

1)用于一種紅果參離體外繁方法,首先進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo),將消毒滅菌處理后紅果參外植體接種于MS基本培養(yǎng)基A中培養(yǎng)后有愈傷組織出現(xiàn),將愈傷組織切割轉(zhuǎn)接至MS基本培養(yǎng)基B中培養(yǎng),愈傷組織不斷增殖,且表面分化出叢生芽,將叢生芽切割轉(zhuǎn)接至MS基本培養(yǎng)基C中;將叢生芽按40d的生長周期輪流接入MS基本培養(yǎng)基B與MS基本培養(yǎng)基C,作為紅果參叢生芽分化和增殖的培養(yǎng)方式,反復(fù)繼代增殖3~4代,得到種苗;取種苗中高3?4cm的健壯主苗接種于MS基本培養(yǎng)基D中培養(yǎng)獲得苗壯根粗的生根苗;取生根苗置于室溫下煉苗移栽至消毒后的腐殖質(zhì)中保溫保濕培養(yǎng),生長30d后,即得生根移栽苗。本發(fā)明的有益效果是紅果參繁殖方法成本低、繁殖周期短、質(zhì)量和成活率高。

2)用于鐵皮石斛快速繁殖,包括外植體清洗消毒;外植體接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:MS基本培養(yǎng)基、6-BA2.0mg/L-3.0mg/L、NAA0.2mg/L;不定芽莖段接種于原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基:B5基本培養(yǎng)基、NAA2.0mg/L、6-BA0.2mg/L、KT0.5mg/L-2.0mg/L;原球莖轉(zhuǎn)接于原球莖增殖培養(yǎng)基:1/2MS基本培養(yǎng)基、椰汁50g/L;原球莖轉(zhuǎn)接入分化培養(yǎng)基:1/2MS基本培養(yǎng)基、NAA0.2mg/L、馬鈴薯浸提物80-100g/L;將分化苗接種于壯苗生根培養(yǎng)基:1/2MS基本培養(yǎng)基、香蕉浸提物100-150g/L。本發(fā)明提高鐵皮石斛組培苗成活率,植株健壯。

3)用于花葉玉簪植物組織培養(yǎng)基配制,涉及一種植物組織培養(yǎng)技術(shù)。該配制方法采用組織培養(yǎng)技術(shù),通過改變激素配比使其適應(yīng)花葉玉簪的生長發(fā)育,其配方由分化培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基組成,分化培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)基中加入6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸兩種激素,生根培養(yǎng)基是在MS基本培養(yǎng)基中加入1-萘乙酸,兩種培養(yǎng)基分別配制、配套應(yīng)用,分化培養(yǎng)基配方:基本培養(yǎng)基MS、6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸、蔗糖、瓊脂粉;生根培養(yǎng)基配方:基本培養(yǎng)基MS、蔗糖、瓊脂粉;通過分化培養(yǎng)基配方的制備和生根培養(yǎng)基配方的制備,獲得兩種培養(yǎng)基。采用本發(fā)明可使培養(yǎng)周期縮短至30天左右,分化倍數(shù)在5-6之間,且沒有變異,苗子整齊度高;接種40天后,生根率達(dá)90-93%,單苗生根條數(shù)在4-8之間。

4)用于一種西蘭花離體細(xì)胞快速增殖,該方法包括以下步驟:⑴制備MS基本培養(yǎng)基;⑵西蘭花離體細(xì)胞獲得及接種方法:將當(dāng)年西蘭花種子沖洗消毒后得到無菌種子;無菌種子接種于MS基本培養(yǎng)基上,培養(yǎng)14d后得到無菌苗;切取胚芽并以正面朝上接種到MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,于黑暗、溫度為24~26℃條件下脫分化培養(yǎng)30d即得西蘭花離體細(xì)胞;⑶西蘭花離體細(xì)胞增殖方法:將西蘭花離體細(xì)胞接種于MS增殖培養(yǎng)基上,于黑暗、溫度為24~26℃條件下培養(yǎng)15~20d即可。本發(fā)明方法簡便、快捷,可以定向調(diào)控離體細(xì)胞的快速增殖與發(fā)育,提高細(xì)胞的增殖速率,從而擺脫西蘭花自然生長規(guī)律,縮短繁殖周期。

制備[2]

配制MS基本培養(yǎng)基是日常工作,為簡便操作,可將配方中的藥品一次稱量后供一段時間使用,這種儲備液,按藥品種類和性質(zhì)分別配制保存:

一般大量元素使用濃度需稀釋約10~100倍,微量元素等需稀釋約200~1000倍。要注意過高的濃度和不恰當(dāng)?shù)幕旌吓湟簳鸪恋?,影響培養(yǎng)基效果。一般應(yīng)按表列順序依次稱量,分別溶解在少量蒸餾水中,最后再依次加到一起,并定容到規(guī)定的體積。配制培養(yǎng)基用不銹鋼鍋,首先應(yīng)在鍋里加入蒸餾水(蒸餾水可排除水中的鈉離子等雜質(zhì)對植物生長時的影響)。再放入瓊脂和糖,瓊脂充分溶解后加入儲備液1、2、3、4植物激素。加蒸餾水到需要的體積,充分混合好以后用0.1molKOH或0.1molHCl調(diào)整pH值,菊葉薯蕷培養(yǎng)基pH值應(yīng)調(diào)整到6~6.4,然后裝瓶滅菌。滅菌時間一般應(yīng)在20分鐘,時間過長易破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分及植物激素,影響植物生長。

主要參考資料

[1]作物育種與良種繁育學(xué)詞典

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