背景[1][2]
網(wǎng)織紅細(xì)胞染色液由燦爛甲酚藍(lán)、梮櫞酸鈉、氯化鈉、聚乙烯吡咯烷酮、純化水組成。主要用于網(wǎng)織紅細(xì)胞的染色，以便于鏡下對網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。
骨髓中紅細(xì)胞系統(tǒng)的增生發(fā)育過程是：多能干細(xì)胞→單能干細(xì)胞→原始紅細(xì)胞→早幼紅細(xì)胞→中幼紅細(xì)胞→晚幼紅細(xì)胞→網(wǎng)織紅細(xì)胞→成熟紅細(xì)胞。從原始紅細(xì)胞增殖到晚幼紅細(xì)胞階段共分裂3－4次，約需72小時(shí)，紅細(xì)胞數(shù)由一個(gè)變?yōu)?一16個(gè)，細(xì)胞核由大變小而濃縮，胞漿中含血紅蛋白逐漸增多。
晚幼紅細(xì)胞以后細(xì)胞即不再分裂，發(fā)育過程中核被排出而成為網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞含有少量核糖核酸RNA)，用煌焦油藍(lán)染色時(shí)成網(wǎng)狀故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)一步成熟，RNA消失而為成熟紅細(xì)胞。從晚幼紅細(xì)胞發(fā)育到成熟紅細(xì)胞約需48小時(shí)，成熟紅細(xì)胞的壽命約為120天。
網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞到完全成熟的紅細(xì)胞之間的過度型細(xì)胞，由于其細(xì)胞漿中尚存在嗜堿性的RNA物質(zhì)，用網(wǎng)織紅細(xì)胞染色液進(jìn)行活體染色后，胞漿中鏡檢可見有淺藍(lán)色或深藍(lán)色的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
網(wǎng)織紅細(xì)胞染色液有新亞甲藍(lán)或煌焦油藍(lán)等組成，呈中性，用于網(wǎng)織紅細(xì)胞活體染色，利用本染色液所染出的結(jié)果，背景顏色明亮清晰，而且不受長時(shí)間染色的影響。該染色液僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或其他用途。
應(yīng)用[3]
用于紅細(xì)胞胞質(zhì)因子對K～（562）細(xì)胞分化及其核基質(zhì)—中間纖維體系影響的研究
以兔網(wǎng)織紅細(xì)胞與人紅白血病細(xì)胞融合后篩選出的胞質(zhì)雜交體K—RRneo細(xì)胞為研究對象，系統(tǒng)地研究了細(xì)胞雜交前后的生長、分化特性及其核基質(zhì)—中間纖維體系的變化規(guī)律。
采用Lipofectin轉(zhuǎn)基因的方法，首次以無核的哺乳類細(xì)胞（兔網(wǎng)織紅細(xì)胞）作為外源基因?qū)氲陌屑?xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：網(wǎng)織紅細(xì)胞雖然沒有核，但由于它具有可供外源基因表達(dá)的完備元件，可使導(dǎo)入的報(bào)告基因Lac Z在胞質(zhì)中表達(dá)。
利用轉(zhuǎn)入可供選擇的外源基因，獲得了攜有pSV2neo基因的兔網(wǎng)織紅細(xì)胞，并使之與人紅白血病細(xì)胞K562相融合，篩選出具有G418抗性的胞質(zhì)雜交體K—RRneo細(xì)胞。
該實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ洼^經(jīng)典的誘導(dǎo)突變、抗性篩選、細(xì)胞融合等方法的效率明顯提高，且可避免由于網(wǎng)織紅細(xì)胞缺乏核基因組、HGPRTmRNA半衰期有限，而不能長期保持HGPRT表型的弱點(diǎn)，以導(dǎo)入基因?yàn)檫z傳標(biāo)志，使實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ驮谘芯炕虮磉_(dá)調(diào)控、腫瘤細(xì)胞惡性逆轉(zhuǎn)等有關(guān)分化問題時(shí)具有實(shí)用價(jià)值。
利用建立的胞質(zhì)雜交體K—RRneo細(xì)胞為研究對象，并以其親代的K562細(xì)胞為對照，系統(tǒng)地研究了細(xì)胞雜交前后的生長及分化特性改變。結(jié)果顯示：K—RRneo細(xì)胞的生長較親代K562細(xì)胞明顯緩慢，細(xì)胞增殖率降低、分裂指數(shù)下降、DNA合成速率減慢。
利用c—myc癌基因探針的分子雜交技術(shù)檢測，結(jié)果可見K—RRneo細(xì)胞的c—myc基因表達(dá)明顯降低，只能檢測到極其微弱的c—myc mRNA。
應(yīng)用聯(lián)苯胺藍(lán)染色、Northern blot、RT—PCR及DNA測序等技術(shù)，分別對細(xì)胞雜交前后珠蛋白在翻譯及轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)進(jìn)行了探測。
結(jié)果顯示：親代K562細(xì)胞內(nèi)原已關(guān)閉的β—珠蛋白基因，在雜交細(xì)胞K—RRneo內(nèi)被激活，K—RRneo細(xì)胞可檢測到珠蛋白基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
上述結(jié)果以新的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，又一次證實(shí)了紅細(xì)胞胞質(zhì)因子的存在及其對K562細(xì)胞的惡性調(diào)控作用，為探索胞質(zhì)因子對細(xì)胞分化及腫瘤細(xì)胞逆分化的調(diào)控作用提供了新的理論依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
[1]Cell-contact and-architecture of malignant cells and their relationship to metastasis[J] . Avraham Raz,Avri Ben-Ze’ev. CANCER AND METASTASIS REVIEW . 1987 (1)
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[3]馬文麗. 紅細(xì)胞胞質(zhì)因子對K～（562）細(xì)胞分化及其核基質(zhì)—中間纖維體系影響的研究[D].中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué),1993.