背景[1-3]
人細(xì)胞色素B561(CYTB561)ELISA KIT應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中細(xì)胞色素b561(cytb561)水平。用純化的細(xì)胞色素b561(cytb561)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素b561(cytb561)，再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素b561(cytb561)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素b561(cytb561)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中細(xì)胞色素b561(cytb561)濃度。
細(xì)胞色素一類以鐵卟啉（或血紅素）作為輔基的電子傳遞蛋白，廣泛參與動、植物，酵母以及好氧菌、厭氧光合菌等的氧化還原反應(yīng)。細(xì)胞色素作為電子載體傳遞電子的方式是通過其血紅素輔基中鐵原子的還原態(tài)(Fe2+)和氧化態(tài)（Fe3+）之間的可逆變化。任何一類細(xì)胞蛋白（血紅素蛋白），在細(xì)胞能量轉(zhuǎn)移中起著極為重要的作用。
細(xì)胞色素可按其吸收的光的波長分為3類，已鑒定出至少30種不同的細(xì)胞色素。卟啉環(huán)以四個配價(jià)鍵與鐵原子相連，形成四配位體螯合的絡(luò)合物，一般稱為血紅素。根據(jù)血紅素輔基的不同結(jié)構(gòu),可將細(xì)胞色素分為a、b、c和d類。b類細(xì)胞色素的輔基是原血紅素即鐵-原卟啉Ⅸ。卟啉環(huán)上的側(cè)鏈取代基為4個甲基,兩個乙烯基和兩個丙酸基與血紅蛋白、肌紅蛋白輔基的結(jié)構(gòu)相同。
應(yīng)用[4][5]
用于人CYP3A4與POR及cyt b5共表達(dá)條件的優(yōu)化以及表達(dá)產(chǎn)物在藥物相互作用研究
人細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)是一大類含有血紅素分子的單加氧酶超家族,對外源及內(nèi)源性的物質(zhì)代謝以及環(huán)境致癌物的活化都起著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞色素P450中主要負(fù)責(zé)藥物代謝的酶有3個家族：CYP1,CYP2和CYP3,包括了：CYP1A2、CYP2A6、CYP2A13、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6.CYP2E1和CYP3A4等。
在人體內(nèi)眾多的CYP450中,CYP3A4是人肝臟中含量最豐富,也是與藥物代謝最為相關(guān)的一類酶。CYP3A4代謝了大約50%的臨床藥物,具有廣泛的代謝底物譜,并且底物結(jié)構(gòu)和親和力具有多樣性。睪酮和咪達(dá)唑侖是CYP3A4活性鑒定的首選經(jīng)典底物。CYP3A4催化的典型代謝途徑有C-氧化,如尼古丁(nicotine);N-氧化,如伏立康唑(voriconazole);N-脫烷基,如芬太尼(fentanyl);O-脫烷基,如氟西汀(fluoxetine);脫氫,如溴哌利多(bromperidol)和氟哌啶醇(haloperidol);硝基還原,如氯硝西泮(clonazepam)和C-羥化,如特非那定(terfenadine)(Guergerich FPetal.,1999)。
人細(xì)胞色素P450氧化還原酶(cytochrome P450oxidoreductase,POR)是一個錨定在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的重要黃素蛋白(Williams CH et al.,1962;Phillips AH et al.,1962;Pandey AV et al.,2010;Miller WL et al.,2011),能通過其FMN與FAD輔基將NADPH上的電子傳遞給CYP450,以實(shí)現(xiàn)CYP450對底物的氧化功能。
參考文獻(xiàn)
[1]High-throughput inhibition screening of major human cytochrome P450 enzymes using an in vitro cocktail and liquid chromatography-tandem mass spectrometry.Testino SA Jr,Patonay G.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis.2003
[2]Evaluation of cytochrome P450 probe substrates commonly used by the pharmaceutical industry to study in vitro drug interactions.Yuan R,Madani S,Wei X X,Reynolds K,Huang S M.Drug Metabolism and Disposition.2002
[3]The conduct of in vitro and in vivo drug-drug interaction studies:a Pharmaceutical Research and Manufacturers of America(PhRMA)perspective.Bjornsson TD,Callaghan JT,Einolf HJ,et al.Drug Metabolism and Disposition.2003
[4]Cytochrome P-450 3A4:regulation and role in drug metabolism.Guengerich FP.Annual Review of Pharmacology and Toxicology.1999
[5]謝章明.人CYP3A4與POR及cyt b_5共表達(dá)條件的優(yōu)化以及表達(dá)產(chǎn)物在藥物相互作用研究中的應(yīng)用[D].浙江大學(xué),2013.