背景[1-3]
特級(jí)馬血清是用健康FPS蒙古馬制得的無(wú)菌血清，較普通級(jí)馬血清溶血現(xiàn)象更少。10%的馬血清可以代替FBS支持抗srbc體外抗體細(xì)胞的培養(yǎng)。此外馬血清可用于產(chǎn)生C2異質(zhì)核子以及初級(jí)神經(jīng)元培養(yǎng)?；A(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清，血清終濃度多為5－20％。特殊用途的血清來(lái)源需用經(jīng)驗(yàn)確定。廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與牛血清，胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其做增殖細(xì)胞用的血清，也用于細(xì)胞系和原代培養(yǎng)。而馬血清常常用來(lái)做有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。
然而，很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養(yǎng)，也有人用馬血清來(lái)培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞。馬血清純天然制品，含有豐富的蛋白，可以替換FBS用于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，不宜用于昆蟲(chóng)細(xì)胞的培養(yǎng)。馬血清含有更多的生長(zhǎng)因子，尤其適用于造血干細(xì)胞的培養(yǎng)。另外馬血清還可以用于原代神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)和支原體的培養(yǎng)。
馬血清還可以用于異核體細(xì)胞的形成、綿羊紅細(xì)胞的體外抗體反應(yīng)以及肌肉細(xì)胞的誘導(dǎo)分化等。
細(xì)胞培養(yǎng)中血清的作用
1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物.
2.提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力.
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用.
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源.
5.起酸堿度緩沖液作用.
應(yīng)用[4][5]
用于綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化研究
以綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞作為研究對(duì)象,重點(diǎn)探討衛(wèi)星細(xì)胞的分離、純化及體外培養(yǎng)方法,并對(duì)得到的細(xì)胞進(jìn)行鑒定,旨在建立可穩(wěn)定傳代的綿羊衛(wèi)星細(xì)胞系及其鑒定方法,為今后綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞在家畜繁育和再生醫(yī)學(xué)等相關(guān)方面的研究和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
用兩步酶消化法和差速貼壁法分離和純化綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,并對(duì)其進(jìn)行鑒定和誘導(dǎo)分化,分析其多能性。
結(jié)果表明,1.1%Ⅰ型膠原酶和0.25%胰蛋白酶兩步消化法分離綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞效率較高,含20%FBS+10%馬血清的培養(yǎng)基更有利于綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的體外培養(yǎng)。
用免疫組化和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞中幾個(gè)標(biāo)記基因Desmin、α-SarcOmeric Actinin、MyOD1、Myf5和PAX7的表達(dá)情況,得到的細(xì)胞中這5個(gè)基因表達(dá)均呈陽(yáng)性,說(shuō)明分離得到的細(xì)胞為綿羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞。
為驗(yàn)證其多能性,將分離得到的衛(wèi)星細(xì)胞向成肌、成脂和成骨三個(gè)方向誘導(dǎo)。成肌誘導(dǎo)后形成明顯的多核肌管細(xì)胞,標(biāo)記基因MyoG表達(dá)陽(yáng)性,快肌肌球蛋白細(xì)胞免疫熒光染色呈陽(yáng)性；成骨誘導(dǎo)后經(jīng)茜素紅和ALP染色細(xì)胞均呈陽(yáng)性,成骨細(xì)胞特異性基因Osteocalcin表達(dá)陽(yáng)性；成脂誘導(dǎo)后細(xì)胞周圍有明顯的脂滴出現(xiàn),經(jīng)0-油紅染色呈陽(yáng)性,且PPARy2表達(dá)呈陽(yáng)性。
參考文獻(xiàn)
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