大鼠肝細(xì)胞BRL-3A的簡(jiǎn)介[1]
名稱：BRL-3A (大鼠肝細(xì)胞) (種屬鑒定正確)
種屬：大鼠
組織來(lái)源：肝
生長(zhǎng)特性：貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生物安全等級(jí)：1
生長(zhǎng)培養(yǎng)基：DMEM(PM150210) + 10% FBS(164210-500) + 1% P/S(PB180120)
推薦傳代比例：1:2-1:4
推薦換液頻率：2~3次周
凍存條件：凍存液: 55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS + 5%DMSO ；溫度:液氮
培養(yǎng)條件：氣相:空氣, 95%; CO2, 5%；溫度: 37°C
保藏機(jī)構(gòu)：RCB; RCB0273
收到細(xì)胞后操作[1]
收到細(xì)胞以后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；然后將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25 培養(yǎng)瓶或6cm 培養(yǎng)皿（不需要離心），加入5ml 左右含F(xiàn)BS 的培養(yǎng)基均勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞匯合度：若未超過(guò)80%匯合度，換液繼續(xù)培養(yǎng)，根據(jù)情況傳代或者凍存。若超過(guò)80%匯合度，可直接進(jìn)行傳代（細(xì)胞貼壁處理方法）。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過(guò)來(lái)讓胰酶與細(xì)胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒(méi)有特別說(shuō)明，收到細(xì)胞后的次傳代一般是一傳三。
主要參考文獻(xiàn)
[1] 姚娟娟，周曉蓉，牛廷勇；單壁碳納米管對(duì)大鼠肝細(xì)胞株BRL-3A的毒性作用?！抖纠韺W(xué)雜志》。