背景[1-3]
人抗丁型肝炎病毒抗體(ANTI-HDV)ELISA KIT用于固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。已知anti-HDV濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將anti-HDV和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中anti-HDV的活性濃度呈比例關(guān)系。
丁型肝炎病毒體形細(xì)小，直徑35～37nm，核心含單股負(fù)鏈共價(jià)閉合的環(huán)狀RNA和HDV抗原（HDAg），其外包以HBV的HBsAg。經(jīng)核酸分子雜交技術(shù)證明，HDV RNA與HBV DNA無同源性，也不是宿主細(xì)胞的RNA。HDV的致病機(jī)理與免疫性還不清楚。一般認(rèn)為HDV對(duì)肝細(xì)胞有直接的致細(xì)胞病變作用。在HDV感染黑猩猩的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，HDV—RNA的消長(zhǎng)與肝臟損害的程度相關(guān)。丁型肝炎的收藏，HDAg主要存在于肝細(xì)胞核內(nèi)，隨后出現(xiàn)HDAg血癥，可用免疫熒光、放射免疫或酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以及核酸雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。但患者標(biāo)本應(yīng)先經(jīng)去垢劑處理，除去表面的HBsAg以暴露出HDAg，才能檢測(cè)到。HDAg可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異的抗—HDV，先是lgM型，隨后是lgG型抗體的出現(xiàn)。在慢性感染過程中所檢出的抗體常以lgG為主。血清中抗HDV測(cè)定有助于HDV感染的診斷，尤其高滴度可確診為慢性HDV感染。抗HDV-IgG陽性見于HBsAg陽性者，是診斷丁型肝炎的可靠指標(biāo)，即使HDV感染終止后仍可持續(xù)多年?？笻DV-IgM陽性表示急性或近期HDV感染，有助于本病的早期診斷，并能區(qū)別HBV和HDV同時(shí)感染還是重疊感染。同時(shí)感染常出現(xiàn)一過性抗HDV-IgM，然后出現(xiàn)或不出現(xiàn)抗HDV-IgG;重疊感染時(shí)抗HDV-IgM持續(xù)升高，并伴有抗HBV-IgG陽性，癥狀加重，預(yù)后不良。
應(yīng)用[4][5]
人抗丁型肝炎病毒抗體(ANTI-HDV)ELISA KIT用于丁型肝炎病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系的建立。
丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)是一種類病毒樣核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒,這種缺陷型病毒需要乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)提供乙型肝炎病毒表面抗原(Hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)用于病毒的組裝、釋放和感染。與單獨(dú)的HBV感染相比,合并HDV感染后會(huì)加速肝硬化的程度,會(huì)增加暴發(fā)性肝炎和肝細(xì)胞癌的發(fā)生率。目前丁型肝炎病毒的獲取方式有兩種:一種是從丁型肝炎患者的血清中直接提取HDV,但我國(guó)丁型肝炎的患者比較少見,若想依賴從血清中直接提取HDV的這種途徑不現(xiàn)實(shí);另外一種是基于質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HuH-7等細(xì)胞系的HDV包裝方法,但是當(dāng)研究需要大量病毒時(shí)工作量會(huì)明顯增大,而且實(shí)驗(yàn)批次之間的可重復(fù)性也較差。
采用分子克隆方法構(gòu)建出含HDV復(fù)制子和HBsAg表達(dá)框的piggyBac(PB)轉(zhuǎn)座子載體并進(jìn)行了功能評(píng)價(jià)。將構(gòu)建好的載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Hu H-7細(xì)胞,通過檢測(cè)細(xì)胞上清HDV RNA和HBsAg的含量初步確定載體的功能完好,相關(guān)功能基因得到有效表達(dá),并通過濃縮細(xì)胞上清病毒后感染HBV受體鈉離子/?；悄懰峁厕D(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Na+/taurocholate Cotransporting Polypeptide,NTCP)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系HepG2.N9確定了細(xì)胞上清含有感染性HDV顆粒。進(jìn)一步通過化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)細(xì)胞上清HBV表面抗原的含量,ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清HBV preS1的水平,以及定量PCR檢測(cè)細(xì)胞上清HDV病毒滴度,利用HBV受體NTCP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系HepG2.N9評(píng)價(jià)了細(xì)胞上清HDV病毒體外感染性,結(jié)果表明本研究成功建立了支持HDV復(fù)制、包裝、分泌的人源肝癌細(xì)胞系K7,其細(xì)胞上清可檢測(cè)到大量的HBsAg并可檢測(cè)到HBV preS1的存在,細(xì)胞上清HDV滴度達(dá)到1E+08GE/ml(GE,genome equivalents)以上,并且證明本細(xì)胞所分泌的HDV病毒體外具有較好的感染性。
參考文獻(xiàn)
1.Celso Cunha;Jo?o Paulo Tavanez;Severin Gudima;;Hepatitis delta virus:A fascinating and neglected pathogen[J];World Journal of Virology;
2.John M Taylor;;Host RNA circles and the origin of hepatitis delta virus[J];World Journal of Gastroenterology;
3.楊松;邢卉春;成軍;;慢性丁型肝炎抗病毒治療進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志;
4.盧學(xué)新;伊瑤;畢勝利;;丁型肝炎的分子生物學(xué)特征及研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;
5.李穎.丁型肝炎病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系的建立[D].河北北方學(xué)院,2017.