背景[1-3]
細胞增殖檢測是判定細胞活力的重要指標，有多種顯示方法，除實驗的細胞計數(shù)法之外，還可以進行細胞分裂指數(shù)的測定。細胞分裂是細胞增殖的方式，能比較確切地反映細胞增殖度。細胞增殖是指細胞在周期調(diào)控因子的作用下通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進行分裂的一系列過程。細胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、藥理和藥代動力學(xué)等研究領(lǐng)域。
檢測細胞增殖的技術(shù)主要包括：
(1)滲透實驗。這種方法用來染細胞膜破損的細胞,活細胞不會被臺盼藍染成藍色。然后通過細胞計數(shù)器手動計數(shù)細胞數(shù)目。此方法快速、便宜、僅僅需要一少部分細胞。細胞傳代、凍存、或其它實驗可以用這種方法?；蛘咭部梢酝ㄟ^流式細胞儀來計數(shù)細胞數(shù)目。檢測前可以染PI排除死細胞。
(2) 直接增殖測定。這種方法利用DNA整合來測定細胞增殖。此方法利用整合到DNA中的放射性或非放射性的核酸類似物來檢測。比如：Brdu免疫化學(xué)染色法需要將細胞或組織標本經(jīng)過變性處理,這就影響了標本的結(jié)構(gòu),使標本不適合下游實驗,也使得染色結(jié)果及程度過分地依賴于不同實驗所應(yīng)用的不同條件。
(3) 細胞代謝法。這種方法是將四唑鹽加入細胞培養(yǎng)基內(nèi),這些四唑鹽可以被活細胞轉(zhuǎn)化為有顏色的甲瓚,用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量。此方法已廣泛用于各種細胞增殖的檢測,生物活性因子的活性檢測,大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選,細胞毒性試驗等。
應(yīng)用[4][5]
用于細胞膜熒光染料用于定量檢測體內(nèi)外細胞增殖和肝脂肪酶在腫瘤細胞耐藥中的作用研究
在同一群腫瘤細胞中定量測定了各亞群細胞分裂次數(shù),同時保持細胞完整性,可繼續(xù)進行細胞功能的測定,也可提取細胞蛋白和RNA進行測定。
有研究指出APOBEC3G,、CD133、LIPC和S100P在功能上調(diào)節(jié)大腸癌的肝轉(zhuǎn)移,其陽性預(yù)示著大腸癌存在肝轉(zhuǎn)移。另一項研究顯示非小細胞肺癌中LIPC表達水平可能具有一個獨立的預(yù)后價值。
因此,本實驗利用這種新的DiO染色方法研究了LIPC在腫瘤細胞耐藥中的機制。主要方法及結(jié)果1DiO的研究1.1DiO和DiD同屬親脂性羰花青染料。它們是由兩個對稱的環(huán),每個環(huán)連接一個長的碳氫鏈,環(huán)中間由奇數(shù)個次甲基連接構(gòu)成。雙環(huán)結(jié)構(gòu)及連接雙環(huán)的次甲基數(shù)目的不同決定了熒光分子的特性。
碳氫鏈的長短決定了它們與膜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的親疏性。DiO的吸收和釋放波長分別是484nm和501nnm,DiD的吸收和釋放波長分別是644nm和665nm。1.2MTT測定DiO染色后細胞的增值情況。
結(jié)果顯示DiO染色后Lovo、SW480、SW620、CT26、HepG2細胞在1、2、3天不影響其增殖P>0.05。
參考文獻
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[5]左俊華.細胞膜熒光染料用于定量檢測體內(nèi)外細胞增殖和肝脂肪酶在腫瘤細胞耐藥中的作用[D].南方醫(yī)科大學(xué),2014.