背景[1-3]
ANTI-HISTONE H3(DI METHYL K4)抗體是一類可以特異性結(jié)合Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)的多克隆抗體，主要用于檢測Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)水平。用純化的Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)，再與HRP標記的Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中Anti-HISTONE H3(DI METHYL K4)濃度。
組蛋白（histone）是指所有真核生物的細胞核中，與DNA結(jié)合存在的堿性蛋白質(zhì)的總稱。其分子量約10000～20000Kda。
真核生物體細胞染色質(zhì)中的堿性蛋白質(zhì)，含精氨酸和賴氨酸等堿性氨基酸特別多，二者加起來約為所有氨基酸殘基的1/4。組蛋白與帶負電荷的雙螺旋DNA結(jié)合成DNA-組蛋白復(fù)合物。因氨基酸成分和分子量不同，主要分成5類。
組蛋白對染色體的結(jié)構(gòu)起重要的作用。染色體是由重復(fù)單位──核小體組成。每一核小體包括一個核心8聚體（由4種核心組蛋白H2A、H2B、H3和H4的各兩個單體組成）；長度約為200個堿基對的脫氧核糖核酸(DNA）；和一個單體組蛋白H1。長度為147堿基對的DNA盤繞于核心8聚體外面。在核心8聚體之間則由長度約為60個堿基對的DNA連接。
應(yīng)用[4][5]
用于H3K4me3在中耳膽脂瘤中的表達及臨床意義研究
組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤中的表達目的:量化組蛋白H3賴氨酸4的三甲基化(H3K4me3)在中耳膽脂瘤母組織及外耳道上皮組織中的表達,以研究其在中耳膽脂瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的重要意義。
以中耳膽脂瘤患者的膽脂瘤母組織為實驗組,及同一患者的外耳道上皮組織為對照組,根據(jù)免疫印跡實驗(Western blot)結(jié)果分析H3K4me3的表達水平;得到Western blot結(jié)果后,進行免疫組織化學(xué)染色實驗驗證Western blot實驗結(jié)果,并定位H3K4me3在實驗組和對照組中的表達。
結(jié)果:1.免疫印跡實驗結(jié)果顯示組蛋白H3K4me3在膽脂瘤母組織中的表達水平的明顯低于外耳道上皮組織,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2. 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示組蛋白H3K4me3在膽脂瘤上皮組織以及外耳道上皮組織中均有表達,定位于膽脂瘤上皮組織以及外耳道上皮組織細胞核中,表現(xiàn)為上皮組織細胞核中棕黃色或棕褐色顆粒;膽脂瘤母組織中組蛋白H3K4me3的表達量明顯低于外耳道上皮組織,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)論:組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤上皮組織中表達明顯下調(diào),可能參與了中耳膽脂瘤發(fā)生和發(fā)展過程,其有可能成為治療中耳膽脂瘤的新靶點。
參考文獻
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[3]Histone H3K4 methylation-dependent and-independent functions of Set1A/COMPASS in embryonic stem cell self-renewal and differentiation[J].Christie C.Sze,Kaixiang Cao,Clayton K.Collings,Stacy A.Marshall,Emily J.Rendleman,Patrick A.Ozark,Fei Xavier Chen,Marc A.Morgan,Lu Wang,Ali Shilatifard.Genes&Development.2017(17)
[4]MLL2,Not MLL1,Plays a Major Role in Sustaining MLL-Rearranged Acute Myeloid Leukemia[J].Yufei Chen,Konstantinos Anastassiadis,Andrea Kranz,A.Francis Stewart,Kathrin Arndt,Claudia Waskow,Akihiko Yokoyama,Kenneth Jones,Tobias Neff,Yoo Lee,Patricia Ernst.Cancer Cell.2017(6)
[5]王志遠.H3K4me3在中耳膽脂瘤中的表達及臨床意義[D].青島大學(xué),2019.