背景[1-3]
細胞核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單而應(yīng)用廣泛的方法以及相應(yīng)的試劑提取各種用途的核蛋白，整個過程耗時不超過60分鐘.提取的核蛋白可用于：western印跡、蛋白-DNA結(jié)合分析實驗、核酶分析實驗以及各種其它需要活性核蛋白的實驗。提取實驗簡便快捷，可以從哺乳動物細胞和組織樣品中獲得大量核提取產(chǎn)物.試劑盒尤其為滿足各種EpiQuik分析實驗需求而設(shè)計。
細胞核蛋白提取試劑盒的獨特組份（含有特殊的非離子型去污劑以及焦磷酸鈉等數(shù)種蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制試劑），能夠在非變性和低滲的條件下裂解細胞，經(jīng)過洗滌去除大部分胞質(zhì)蛋白和膜蛋白，釋放的細胞核能夠保持完整，再用Lysis Buffer對細胞核蛋白質(zhì)進行抽提的同時可以保持核蛋白的活性。
在研究細胞時經(jīng)常要研究細胞的不同組份，而研究得最多的兩個細胞組份就是細胞核和細胞漿。分離細胞核蛋白和細胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細胞內(nèi)的定位，而且很多時候分離出來的核蛋白可以用于轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的研究，例如EMSA(也稱gel shift)，footprinting等。
應(yīng)用[4][5]
用于肝細胞核蛋白及胞漿蛋白誘導(dǎo)建立的系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)媚Ｐ脱芯?/h3>
為了建立經(jīng)濟、穩(wěn)定、簡便、可重復(fù)性強,并能提供足量研究樣本的系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)媚Ｐ?以便于今后進一步進行SLE發(fā)病機制和治,療學(xué)的研究。
方法：選取1歲齡體重約2.5kg雌性新西蘭白兔50只,隨機分為5組,每組10只。提取同種異體肝臟細胞核蛋白及細胞漿蛋白,設(shè)首次注射時間為第0天,于第0天及第1、2、4、6、8、10、12周末予實驗組兔蛋白提取物500μg/次(濃度為：1 mg/ml),其中,實驗組1皮下注射肝細胞核蛋白,實驗組2皮下注射肝細胞漿蛋白,實驗組3經(jīng)靜脈注射肝細胞漿蛋白；
相同時間點予對照組1皮下注射等體積PBS,予對照組2靜脈注射等體積PBS。實驗組1、2及對照組1首次注射時將抗原制劑與完全弗氏佐劑等體積乳化。于第1周開始至第18周末,每兩周于耳緣靜脈采集各組兔血液,并以特制兔體液收集代謝籠收集各組兔24h尿。
觀測各組兔血Scr、BUN、TP、ALB、ALT、AST等生化指標及24h尿蛋白含量；用ELISA法測定各組兔血清ANA、抗dsDNA抗體及抗Sm抗體。并于第18周末處死所有實驗動物。皮膚組織經(jīng)HE和免疫組化染色；腎臟組織行HE染色、Masson染色和免疫組化染色,并對腎臟和皮膚病變的嚴重程度及范圍進行半定量分級。
參考文獻
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[4]Expression and localization of rabbit B-cell activating factor(BAFF)and its specific receptor BR3 in cells and tissues of the rabbit immune system[J].Jiahui Yang,Richard Pospisil,Rose G.Mage.Developmental and Comparative Immunology.2008(5)
[5]羅彥彥.肝細胞核蛋白及胞漿蛋白誘導(dǎo)建立的系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)媚Ｐ蚚D].廣西醫(yī)科大學(xué),2011.