背景[1-3]
小鼠血清采用健康小鼠血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成，性狀為澄清液體，無噬菌體、低內(nèi)毒素，無溶血無異物無細菌真菌支原體霉形體衣原體等，適用于試驗室或生化科研相關(guān)試驗，滿足不同科研實驗的多種需求。
小鼠血清可用于1.動物免疫、血清IgG制備。2.病理組化封閉、ELISA等免疫實驗中的封閉及保護劑的使用。3.細胞體外培養(yǎng)相關(guān)實驗。
小鼠血清來源于非免疫的小鼠宿主，經(jīng)過脂質(zhì)萃取和含NaN3的PBS溶液透析，改善其透明度。在病理組化封閉中推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍，配成5%-20%的工作液，直接滴加在組織切片或者細胞涂片上，37℃度孵育10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。
在細胞培養(yǎng)中培養(yǎng)細胞用的培養(yǎng)基為人工合成，但動物細胞生活的內(nèi)環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚，加入動物血清是為了給體外培養(yǎng)的細胞提供一個類似生物體內(nèi)的環(huán)境，此外動物血清中也包含了一些動物的激素和酶,可以促進細胞的發(fā)育。主要作用有：
1、提供基本營養(yǎng)物質(zhì)或合成培養(yǎng)基所缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)：如氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等；
2、提供有利于細胞生長增殖所需的激素、生長因子；
3、提供貼壁細胞所需的貼壁因子和擴展因子；
4、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用，使細胞免受蛋白酶的損傷；
5、血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用；
6、血清中的結(jié)合蛋白還可消除某些毒素和金屬對細胞的毒性作用。
應(yīng)用[4][5]
用于瑞香素對小鼠淋巴細胞免疫抑制效果及其作用機制的研究
選用具有較低毒性和潛在免疫抑制活性的DAP進行后續(xù)免疫抑制作用的研究。研究旨在研究DAP對小鼠淋巴細胞的免疫抑制作用和基本機制。
前期研究證明在體外，DAP能夠抑制ConA和LPS誘導的小鼠脾細胞的增殖反應(yīng)，提示其對T淋巴細胞和B淋巴細胞的增殖反應(yīng)有直接的抑制作用。細胞增殖主要是通過細胞周期調(diào)控的，細胞周期由不同的連續(xù)的階段（G0/G1，S，G2/M）組成。使用碘化丙啶染色法分析細胞周期分布情況，通過流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，隨著DAP濃度的增加，處于G0/G1期的細胞數(shù)增加，處于S期和G2/M期的細胞數(shù)則減少，說明DAP是在G0/G1期阻斷DNA合成來抑制小鼠淋巴細胞有絲分裂和細胞過度增殖。細胞因子是免疫系統(tǒng)重要的調(diào)節(jié)劑和效應(yīng)劑。
尤其是多種促炎細胞因子已被證明與多種自身免疫性疾病有關(guān)。在本研究中，我們使用的ConA作為T細胞有絲分裂原，選擇Th1型細胞因子IL-2、IFN-γ和Th2細胞因子IL-4、IL-6用于檢測DAP對Th1和Th2細胞的影響。
結(jié)果表明，DAP可以顯著抑制ConA誘導的小鼠脾細胞主要細胞因子分泌和mRNA的表達，提示其抑制細胞因子產(chǎn)生的作用環(huán)節(jié)在mRNA表達階段。這些研究表明，DAP的免疫抑制作用與抑制細胞因子的產(chǎn)生與分泌有關(guān)系。
細胞內(nèi)Ca2+是一種典型的細胞內(nèi)信使，它的許多細胞效應(yīng)是通過鈣調(diào)蛋白（CaM）轉(zhuǎn)導，Ca2+/CaM復合物調(diào)節(jié)多種下游目標包括蛋白質(zhì)激酶和磷酸酶。
其中，與免疫相關(guān)的最重要的兩條途徑是受CaM調(diào)節(jié)的CaN-NFAT途徑和CaMKⅡ-NF-κB途徑。
參考文獻
[1]Biochemical and biological studies on 2-desamino-2-methylaminopterin,an antifolate the polyglutamates of which are more potent than the monoglutamate against three key enzymes of folate metabolism.Rosowsky A,Galivan J,Beardsley G P,Bader H,O’Connor B M,Russello O,Moroson B A,DeYarman M T,Kerwar S S,Freisheim J H.Cancer Research.1992
[2]Suppressive effect of mizoribine on progression of bovine serum albumin nephritis in mice.Chen X M,Aozuka S,Kobayashi Y.Nihon Jinzo Gakkai shi.1987
[3]Therapeutic potential of B and T lymphocyteattenuator expressed on CD8+T cells for contact hypersensitivity.Nakagomi D,Suzuki K,Hosokawa J,et al.Journal of Investigative Dermatology.2013
[4]Dysregulated phosphorylation of Ca(2+)/calmodulin-dependent protein kinase II-αin the hippocampus of subjects with mild cognitive impairment and Alzheimer’s disease.Reese Lindsay C,Laezza Fernanda,Woltjer Randall,Taglialatela Giulio.Journal of Neurophysiology.2011
[5]宋博翠.瑞香素對小鼠淋巴細胞免疫抑制效果及其作用機制的研究[D].吉林大學,2014.