背景[1-3]
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白（BSA）是以牛血為原料分離出血清，用硫酸銨分級沉淀后，經(jīng)辛酸處理精制而得。
牛血清白蛋白溶液在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，減輕不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性的。
牛血清白蛋白結(jié)構(gòu)圖
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的簡單蛋白，是血液的主要成分（38g/1000ml），分子量68kD。等電點(diǎn)4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。僅含己糖和己糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581個(gè)氨基酸殘基組成，其中35個(gè)半胱氨酸組成17個(gè)二硫鍵，在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營養(yǎng)作用。在動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。
用途
1、用于生化研究、遺傳工程和醫(yī)藥研究
2、用作醫(yī)藥保健食品、調(diào)味品
3、維持滲透壓、pH緩沖、載體作用
4、在PCR體系中有助于Taq酶的穩(wěn)定性及活性，可以提高PCR的效率
應(yīng)用[4][5]
用于熒光光譜法研究不同溶液環(huán)境中牛血清白蛋白的變化研究
通過改變牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin BSA）溶液所處的環(huán)境從穩(wěn)態(tài)熒光到時(shí)間分辨熒光、從牛血清白蛋白中的芳香族氨基酸到大分子蛋白等不同研究思路深入分析了在不同溶液環(huán)境中牛血清白蛋白變化前后的光譜特性。
其主要研究內(nèi)容如下:（1）研究了在不同pH環(huán)境中三種氨基酸（色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸）和牛血清白蛋白的紫外吸收光譜、穩(wěn)態(tài)熒光光譜以及時(shí)間分辨熒光光譜。結(jié)果表明,色氨酸和酪氨酸在溶液pH=10.0后受到的影響比較大,而苯丙氨酸在不同pH溶液環(huán)境中相對穩(wěn)定。BSA在不同pH中表現(xiàn)出5種形態(tài)的變化,pH 5.0-7.0范圍內(nèi)BSA處在相對穩(wěn)定的狀態(tài)（N態(tài)）;pH 4.0-5.0內(nèi)BSA部分處于膨脹狀態(tài),此時(shí)為F態(tài);pH 2.0-3.0中BSA處于酸膨脹狀態(tài),此時(shí)稱為E態(tài);pH 8.0-10.0中發(fā)射峰微小的藍(lán)移,此時(shí)負(fù)電荷開始聚集,且電子躍遷的能量也在開始改變,此時(shí)的變化相對較少,稱為B態(tài);當(dāng)pH上升到11.0后,吸收峰紅移趨勢變得明顯,熒光壽命降到最低,此時(shí)稱為A態(tài)。
（2）通過在室溫（25℃）、連續(xù)升溫（10℃—90℃）和高溫（90℃）回到室溫（25℃）三種情況中BSA的峰值偏移、熒光強(qiáng)度及熒光壽命分析了在不同溫度溶液中BSA的變化。研究結(jié)果表明,低溫使BSA去活化降低,高溫使BSA變性;BSA經(jīng)高溫回到室溫后有一部分是可逆的。
（3）分析了十二烷基苯磺酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨與牛血清白蛋白混合溶液的穩(wěn)態(tài)熒光光譜變化以及熒光壽命的變化。結(jié)果表明,十二烷基苯磺酸鈉和牛血清白蛋白之間存在靜電引力作用,且極可能是來自于色氨酸殘基,十六烷基三甲基溴化銨的加入促進(jìn)牛血清白蛋白展開,色氨酸殘基的疏水性進(jìn)一步增強(qiáng)。且兩者對牛血清白蛋白的猝滅均為靜態(tài)猝滅。
參考文獻(xiàn)
[1]Probing the heat‐induced structural changes in bovine serum albumin by fluorescence spectroscopy and molecular modelling[J].Florentina‐Mihaela Ursache,Iuliana Aprodu,Oana‐Viorela Nistor,Mihaela Bratu,Elisabeta Botez,Nicoleta St?nciuc.International Journal of Dairy Technology.2017(3)
[2]Amino acid-based cationic gemini surfactant–protein interactions[J].Mafalda A.Branco,Lídia Pinheiro,Célia Faustino.Colloids and Surfaces A:Physicochemical and Engineering Aspects.2014
[3]Assessing the interaction of Hecameg?with Bovine Serum Albumin and its effect on protein conformation:A spectroscopic study[J].J.M.Hierrezuelo,B.Nieto-Ortega,C.Carnero Ruiz.Journal of Luminescence.2014
[4]Interactions of bovine serum albumin with cationic imidazolium and quaternary ammonium gemini surfactants:Effects of surfactant architecture[J].Ting Zhou,Mingqi Ao,Guiying Xu,Teng Liu,Juan Zhang.Journal of Colloid And Interface Science.2013(1)
[5]鄧林波.熒光光譜法研究不同溶液環(huán)境中牛血清白蛋白的變化[D].中國計(jì)量大學(xué),2019.