背景[1-3]
L-540人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞系源自７６歲白人男性的左顳葉側(cè)膠質(zhì)瘤組織，有微絨毛，無(wú)橋粒，CD15及CD30抗原表達(dá)陽(yáng)性，不含有HIV、HBV、HCV、支原體、真菌及其他類型的細(xì)菌。
霍奇金淋巴瘤（HL）是淋巴瘤的一種獨(dú)特類型，為青年人中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。病初發(fā)生于一組淋巴結(jié)，以頸部淋巴結(jié)和鎖骨上淋巴結(jié)常見(jiàn)，然后擴(kuò)散到其他淋巴結(jié)，晚期可侵犯血管，累及脾、肝、骨髓和消化道等。經(jīng)典霍奇金淋巴瘤可分為4種組織學(xué)類型：淋巴細(xì)胞為主型、結(jié)節(jié)硬化型、混合細(xì)胞型和淋巴細(xì)胞耗竭型。
L-540人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞系
病變部位淋巴結(jié)等正常淋巴組織結(jié)構(gòu)全部或部分破壞，呈現(xiàn)多種非腫瘤性反應(yīng)性細(xì)胞成分，多為淋巴細(xì)胞，并可見(jiàn)漿細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、組織細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及纖維組織。
在多種反應(yīng)性細(xì)胞背景成分中散在數(shù)量不等的典型RS細(xì)胞及其變異型。典型RS細(xì)胞為雙核或多核巨細(xì)胞，核仁嗜酸性，大而明顯，胞質(zhì)豐富。若細(xì)胞表現(xiàn)對(duì)稱的雙核稱“鏡影細(xì)胞”。
RS細(xì)胞及不典型（變異型）RS細(xì)胞被認(rèn)為是霍奇金淋巴瘤真正的腫瘤細(xì)胞。最近應(yīng)用單細(xì)胞顯微技術(shù)結(jié)合免疫表型和基因型檢測(cè)，證明RS細(xì)胞來(lái)源于淋巴細(xì)胞，主要來(lái)源于B淋巴細(xì)胞。經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤的RS細(xì)胞CD15及CD30抗原表達(dá)陽(yáng)性，是識(shí)別RS細(xì)胞的重要免疫標(biāo)志。
應(yīng)用[4][5]
用于不同抗原表位CART-30細(xì)胞對(duì)經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤細(xì)胞株的殺傷作用及優(yōu)化研究
研究選擇不同抗原表位的兩種單克隆抗體Ki-4及Ber-H2,優(yōu)化性構(gòu)建不同的CAR基因片段的載體,比較兩種CART細(xì)胞對(duì)CD30陽(yáng)性的cHL細(xì)胞系L428的殺傷作用,以及其機(jī)制與NF-κB信號(hào)通路相關(guān)性進(jìn)行研究。
方法:①構(gòu)建攜帶不同抗原表位的CD30-CAR基因片段的慢病毒載體;
②兩種不同抗原表位的CART-30細(xì)胞的培養(yǎng);
③兩種不同抗原表位CART-30細(xì)胞對(duì)cHL細(xì)胞株的殺傷效率的比較;
④CD30-CARs對(duì)cHL細(xì)胞株NF-κB機(jī)制的影響。
結(jié)果:①成功構(gòu)建出不同抗原表位的CD30-CART細(xì)胞,陽(yáng)性率平均值約為65.7%左右;
②Ki-4組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為35.15%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為66.99%;Ber-H2組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為31.95%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為56.11%;CD19組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為21.92%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為45.49%;CIK組效靶比為1:1時(shí)殺傷效率的平均值為16.99%,效靶比為10:1時(shí)殺傷效率的平均值為32.22%。P<0.05,不同效應(yīng)細(xì)胞間及不同效靶比間的殺傷效應(yīng)均有差異,且此差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
③Western蛋白印跡法結(jié)果示:TNF-α組及Ki-42h及3h組P-P65呈強(qiáng)陽(yáng)性,IκBα蛋白呈弱陽(yáng)性;而空白對(duì)照組、Ki-4的Oh組及Ber-H2各組P-P65及IκBα蛋白均呈現(xiàn)弱陽(yáng)性。
結(jié)論:①不同抗原表位的CD30-CART細(xì)胞對(duì)經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤細(xì)胞殺傷作用不同;
②Ki-4的scFv能有效激活NF-κB信號(hào)通路,但Ber-H2-CARs不能激活NF-κB信號(hào)通路。
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