背景[1-3]
人髓系白血病單核細(xì)胞是從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。
髓單核細(xì)胞白血病（myelomonocytic leukemia，AMMOL）占所有非淋巴細(xì)胞白血病病例的25%，特異性皮膚損害很少見。
人髓系白血病單核細(xì)胞
非典型性單核細(xì)胞在真皮及皮下組織中致密浸潤(rùn)。浸潤(rùn)上方為一明顯的無浸潤(rùn)帶將表皮與浸潤(rùn)分開。偶亦見表皮灶性受累。浸潤(rùn)由多形性單核細(xì)胞和髓源性細(xì)胞混合構(gòu)成。
可見具有不規(guī)則形狀核的不成熟單核細(xì)胞，成熟的單核細(xì)胞，成髓細(xì)胞，偶見嗜酸性粒細(xì)胞。可見核分裂象。腫瘤細(xì)胞排列成帶狀或索狀分散在膠原纖維束間，此外，浸潤(rùn)累及和破壞血管和皮膚附件為AMMOL的特點(diǎn)。
大多數(shù)浸潤(rùn)中的白血病細(xì)胞抗溶菌酶染色呈強(qiáng)陽性。腫瘤細(xì)胞通常氯乙酸酯酶染色陰性。免疫組化顯示腫瘤細(xì)胞主要表達(dá)巨噬細(xì)胞伴發(fā)抗原，此外，冰凍切片可證明單核細(xì)胞和顆粒細(xì)胞標(biāo)識(shí)物L(fēng)eu-M5（CD11c）和My7（CDl3）可呈陽性。
應(yīng)用[4][5]
用于Flt3及4-1BBL分子在單核細(xì)胞和單核系來源白血病細(xì)胞中的作用及其機(jī)理研究
選擇共表達(dá)4-1BBL和Flt3的單核細(xì)胞與單核系白血病細(xì)胞為研究對(duì)象，克隆表達(dá)了人全長(zhǎng)Flt3分子并成功研制了抗人Flt3單克隆抗體，進(jìn)而探討了其生物學(xué)特性；利用抗人Flt3抗體和抗人4-1BBL抗體，初步探討了Flt3信號(hào)和4-1BBL逆向信號(hào)對(duì)SHI-1細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)；同時(shí)還探討了4-1BBL逆向信號(hào)對(duì)單核細(xì)胞的作用及可能的機(jī)理。
1、人Flt3基因的克隆和逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)Flt3基因（GeneBank：Z26652）序列，以骨髓cDNA文庫為模板，在分段克隆的基礎(chǔ)上采用人工延伸等手段獲得人Flt3基因，裝入PMD18-T-Vector載體，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5α大腸桿菌。重組質(zhì)粒T-Flt3經(jīng)測(cè)序正確。重組質(zhì)粒T-Flt3經(jīng)PCR擴(kuò)增Flt3全長(zhǎng)基因并引入PstI和BamHI酶切位點(diǎn)，裝入逆轉(zhuǎn)錄表達(dá)載體pGEZ-term，轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5α大腸桿菌，重組質(zhì)粒pGEZ-Flt3經(jīng)測(cè)序正確。
2、“一箭雙星”法構(gòu)建Flt3轉(zhuǎn)基因細(xì)胞Flt3及4一IBBL分子在單核細(xì)胞和單核系來源白血病細(xì)胞中的作用及其機(jī)理中文摘要pGEZ一Flt3、輔助病毒載體pHIT456和pHIT60混合后，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染包裝.細(xì)胞一293T細(xì)胞，獲得具有感染能力的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒。
3、將含有完整Flt3重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的293T細(xì)胞上清混合WEHI細(xì)胞上清，在同一培養(yǎng)孔中同時(shí)感染L929細(xì)胞和BaF細(xì)胞，而后利用L929細(xì)胞為貼壁非IL一3依賴生長(zhǎng)和BaF細(xì)胞為懸浮IL一3依賴生長(zhǎng)的特點(diǎn)分離培養(yǎng)，并用不同濃度的Zcocine加壓篩選獲得抗性轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的基礎(chǔ)上，采用免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞儀分析，獲得穩(wěn)定表達(dá)Flt3分子的L一Flt3和BaF一Flt3轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。這一轉(zhuǎn)基因策略為懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)基因效率低下提供了新的高效率的解決方案。
參考文獻(xiàn)
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