背景[1-3]
小牛血清是以20天或更小的小牛血液為原料，經(jīng)采集、批量混合、0.1μm微孔濾芯無菌過濾分裝而成，小牛血清外觀黃色澄清，微溶血，有異物稍粘稠液體，內(nèi)毒素含量低于50EU/ml。
小牛血清
血清的功能：
牛血清是細胞培養(yǎng)中用量的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。
（1）提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。
（2）提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調(diào)變它們所結合的物質(zhì)活力。
（3）有些情況下結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合，起到解毒作用。
（4）是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
（5）起酸堿度緩沖液作用。
（6）提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。
解凍血清注意事項：避免產(chǎn)生沉淀物
（1）解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
（2）解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生
（3）請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。
（4）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
（5）若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理。欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。
應用[4][5]
用于PERK/eIF2α通路介導氧化型低密度脂蛋白誘導的內(nèi)皮細胞凋亡及辛伐他汀的干預作用研究
探討辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白誘導的內(nèi)皮細胞凋亡及其與PERK/eIF2a通路的關系。
方法研究辛伐他汀對ox-LDL誘導的內(nèi)皮細胞凋亡、CHOP mRNA、caspase-3活性的影響。培養(yǎng)細胞分為7組：空白對照組：用含1%小牛血清的DMEM培養(yǎng)液孵育內(nèi)皮細胞24小時；ox-LDL組：用含100μg/ml ox-LDL的培養(yǎng)液孵育內(nèi)皮細胞24小時；ox-LDL+辛伐他?。?.μM）組：加入終濃度為0.1μM的辛伐他汀孵育細胞1小時后,加入100μg/ml ox-LDL繼續(xù)孵育24小時；
ox-LDL+辛伐他汀（0.5μM）組：加入終濃度為0.5μM的辛伐他汀孵育細胞1小時后,加入100μg/ml ox-LDL繼續(xù)孵育24小時；ox-LDL+辛伐他汀（2.5μM）組：加入終濃度為2.5μM的辛伐他汀孵育細胞1小時后,加入100μg/ml ox-LDL繼續(xù)孵育24小時；+salubrinal組：加入終濃度為40pM的salubrinal（特異性eIF2a磷酸化抑制劑）孵育細胞1小時后,加入100μg/ml ox-LDL的培養(yǎng)液孵育內(nèi)皮細胞24小時；+DEVD-CHO組：加入終濃度為100μM的DEVD-CHO（特異性caspase-3抑制劑）孵育細胞1小時后,加入100μg/ml ox-LDL的培養(yǎng)液孵育內(nèi)皮細胞24小時；
采用流式細胞儀檢測內(nèi)皮細胞凋亡率,采用Real-time PCR法檢測CHOP mRNA的表達,采用比色法檢測內(nèi)皮細胞內(nèi)caspase-3活性。
參考文獻
[1]Impaired MEK Signaling and SERCA Expression Promote ER Stress and Apoptosis in Insulin-Resistant Macrophages and Are Reversed by Exenatide Treatment[J].Chien-Ping Liang,Seongah Han,Gang Li,Ira Tabas,Alan R.Tall.Diabetes.2012(10)
[2]Autophagy in Atherosclerosis:A Potential Drug Target for Plaque Stabilization[J].Dorien M.Schrijvers,Guido R.Y.De Meyer,Wim Martinet.Arteriosclerosis,Thrombosis,and Vascular Biology.2011(12)
[3]Oxidized Low-Density Lipoprotein and Atherosclerosis Implications in Antioxidant Therapy[J].Sona Mitra,Abhishek Deshmukh,Rajesh Sachdeva,Jingjun Lu,Jawahar L.Mehta.The American Journal of the Medical Sciences.2011(2)
[4]Microparticles,Vascular Function,and Atherothrombosis[J].Pierre-Emmanuel Rautou,Anne-Clémence Vion,Nicolas Amabile,Gilles Chironi,Alain Simon,Alain Tedgui,Chantal M.Boulanger.Circulation Research.2011(5)
[5]張國強.PERK/eIF2α通路介導氧化型低密度脂蛋白誘導的內(nèi)皮細胞凋亡及辛伐他汀的干預作用[D].中南大學,2012.