背景[1-3]
微量蛋白沉淀試劑盒用于微量沉淀濃縮蛋白質(zhì)樣品，其原理是通過酸使蛋白質(zhì)變性，溶解度降低，在離心條件下沉淀，而達(dá)到蛋白變性、蛋白濃縮、蛋白去鹽的目的。他們還有一個(gè)重要的用途是去除污染的鹽離子和其他小分子。
微量蛋白沉淀試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.操作方便迅速，只需要混勻后離心，不需要其他儀器。
2.產(chǎn)品穩(wěn)定，可室溫長期放置。
3.可以處理各種液體樣品(如細(xì)胞或細(xì)菌培養(yǎng)物，細(xì)胞裂解物，蛋白質(zhì)提取物等等)。
4.濃縮效果強(qiáng)，可濃縮濃度低達(dá)1μg/mL的蛋白。
5.可用于含SDS的樣品，但靈敏度稍低(5μg/mL)。
6.得到的蛋白質(zhì)可用于后續(xù)的SDS-PAGE、免疫沉淀和質(zhì)譜分析等實(shí)驗(yàn)。但蛋白已經(jīng)變性，沒有活性。
使用方法：用于不含SDS的樣品，但樣品蛋白濃度不能低于1μg/mL
1、將100μL需要沉淀濃縮的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備的1.5mL塑料離心管中。
2、加入10μL溶液A，渦旋激烈震蕩10-30秒混勻。
3、冰上放置15分鐘。
4、加入10μL溶液B，輕輕混勻。
5、冰上放置60分鐘。
6、4℃12000～15000×g離心10分鐘。
7、小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、加入1mL冰浴的溶液C，震蕩混勻后4℃12000～15000×g離心15分鐘。
9、小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，空氣晾干。一般需要10分鐘左右。
11、樣品放4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?×SDS-PAGE上樣液或其他電泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍(lán)色的溴酚藍(lán)染料變黃，則說明有殘留酸性物質(zhì)TCA污染，必須加少量自備的1M Tris-HCl(pH8.8)緩沖液，直到顏色變成藍(lán)色為止，否則將影響電泳結(jié)果。
應(yīng)用[4][5]
用于從雙液相棉粕中制備濃縮蛋白和分離蛋白研究
棉籽濃縮蛋白的制備在雙液相棉粕中,棉殼約占30%,為了制備棉籽濃縮蛋白,本文利用棉殼和棉仁密度上的差異,通過比較選定了K2CO3溶液作為液選劑制得棉籽濃縮蛋白,并考察了濃度和預(yù)處理方式對分離效果的影響。
棉籽蛋白的功能特性分析了棉籽濃縮蛋白、沉淀蛋白、溶解蛋白三種蛋白產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)含量、植酸含量,并考察了三種蛋白產(chǎn)品的功能特性:溶解性、吸水性、吸油性、乳化性與乳化穩(wěn)定性、起泡性與泡沫穩(wěn)定性等。（1）棉籽濃縮蛋白、沉淀蛋白、溶解蛋白的蛋白質(zhì)含量依次為74.8%,93.6%和83.3%;植酸含量依次為2.69%,1.66%和2.18%。（2）棉籽溶解蛋白氮溶指數(shù)低于菜籽溶解蛋白（91.42%）。當(dāng)pH偏離7.0時(shí),棉籽沉淀蛋白的NSI急劇增加,pH=10.5,NSI=90%。棉籽沉淀蛋白和濃縮蛋白的吸水性和吸油性均隨溫度的升高而增大,在吸水性方面,與菜籽沉淀蛋白相比,棉籽蛋白產(chǎn)品的吸水性要低,但高于大豆沉淀蛋白。在吸油性方面,棉籽蛋白均低于菜籽蛋白和大豆蛋白。
參考文獻(xiàn)
[1]Suitability of commercial cottonseed for producing edible high protein flours by liquid classification[J].R.J.Hron,S.P.Koltun,A.V.Graci.Journal of the American Oil Chemists’Society.1982(5)
[2]Food uses for cottonseed protein[J].James J.Spadaro,Homer K.Gardner.Journal of the American Oil Chemists’Society.1979(3)
[3]Cottonseed protein food products[J].C.M.Cater,K.F.Mattil,W.W.Meinke,M.V.Taranto,J.T.Lawhon,B.B.Alford.Journal of the American Oil Chemists’Society.1977(2)
[4]Aqueous solvents for extracting glanded cottonseed protein without gland rupture[J].L.L.Muller,T.J.Jacks,T.P.Hensarling.Journal of the American Oil Chemists’Society.1976(9)
[5]崔志芹.從雙液相棉粕中制備濃縮蛋白和分離蛋白[D].南京工業(yè)大學(xué),2004.