背景[1-3]
人舌鱗癌細胞源自屬于I級鱗癌(T2N1Amo，Ⅱ期)的原位舌癌的活組織檢查切片。通過干貼壁方法建立于1987年，Tca-8113細胞傳代時間為38小時。傳代第3天有絲分裂指數(shù)為61%，移植效率為86%，軟瓊脂克隆生成率為53-57.7%。Tca-8113細胞經(jīng)ATS處理后在ICR和C57B1小鼠中成瘤，電鏡和組化特征與鱗癌相符。
ACHN人腎癌細胞
使用操作：
接收到細胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過的）培養(yǎng)瓶外部。肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
顯微鏡觀察細胞，當細胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度，培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。1000rpm,5min離心，重懸細胞。
換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃,5%CO2培養(yǎng)。
應用[4][5]
用于野黃芩苷對人舌鱗癌Tca8113細胞增殖的抑制及Bcl-2、Bax表達的影響研究
選用人舌鱗癌Tca8113細胞株，以觀察分析野黃芩苷對人舌鱗癌細胞的生長抑制和凋亡誘導作用的可能機制。
方法：1.人舌鱗癌Tca8113細胞株進行體外培養(yǎng)用于實驗。
2. 實驗分組：分為對照組和不同濃度野黃芩苷組。對照組：用含10%FBS（胎牛血清）的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)舌鱗癌細胞；根據(jù)預實驗結(jié)果，野黃芩苷組：分別用含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液將野黃芩苷配制成的終濃度80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黃芩苷培養(yǎng)液，處理細胞。
3.采用四唑鹽比色（MTT）方法，觀察野黃芩苷作用于人舌鱗癌細胞12h、24h、48h后對增殖活性的影響。
4.采用免疫細胞化學法觀察野黃芩苷作用的人舌鱗癌細胞Bcl-2、Bax蛋白的表達。
5.采用蛋白印跡（Western-blot）技術檢測人舌鱗癌細胞Bcl-2、Bax蛋白的表達。
6.用反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）技術檢測人舌鱗癌細胞Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表達。
7.數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析：應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件，對結(jié)果進行單因素方差分析，用LSD-t檢驗行兩兩比較，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
結(jié)果：1.野黃芩苷對舌鱗癌細胞增殖活性的影響。80μg/ml、120μg/ml和160μg/ml濃度的野黃芩苷分別處理12h、24h和48h后，舌鱗癌細胞的生長受到明顯的抑制，且在一定的時間和濃度范圍內(nèi)呈時間、濃度依賴性，經(jīng)過統(tǒng)計學分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
3. 應用免疫細胞化學染色法檢測，在不同濃度野黃芩苷（80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml）作用下，各組人舌鱗癌細胞連續(xù)培養(yǎng)48h，經(jīng)免疫細胞化學染色法檢測，人舌鱗癌細胞可見Bcl-2、Bax陽性表達，陽性染色主要定位于胞漿，Bcl-2對照組細胞漿著色很深，胞漿呈現(xiàn)清晰的棕黃色,隨著野黃芩苷濃度的增高，Bcl-2的陽性信號越來越弱。
而Bax對照組細胞漿著色很淺，隨著野黃芩苷濃度的增高，Bax的陽性信號越來越強。經(jīng)過統(tǒng)計學分析，各組之間差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
參考文獻
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[2]Inhibition of angiogenesis in vivo and growth of Kaposi’s sarcoma xenograft tumors by the anti-malarial artesunate[J].Raffaella Dell’Eva,Ulrich Pfeffer,Roberta Vené,Luca Anfosso,Alessandra Forlani,Adriana Albini,Thomas Efferth.Biochemical Pharmacology.2004(12)
[3]Correlation of Bcl-2 and Bax with Apoptosis in Human Pituitary Adenomas[J].Demetrios Sambaziotis,Nikiforos Kapranos,George Kontogeorgos.Pituitary.2003(3)
[4]bcl‐2 protein expression is associated with better prognosis in colorectal cancer[J].Leahy,Mulcahy,O’Donoghue,Parfrey.Histopathology.2001(4)
[5]王行天.野黃芩苷對人舌鱗癌Tca8113細胞增殖的抑制及Bcl-2、Bax表達的影響[D].承德醫(yī)學院,2013.