背景[1-3]
人輪狀病毒抗原(RV AG)ELISA試劑盒用于定量檢測血清、血漿及相關液體樣本中人輪狀病毒抗原（RV Ag）的含量。
人輪狀病毒抗原(RV Ag)優(yōu)質(zhì)elisa試劑盒檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被樣本抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
人輪狀病毒抗原(RV AG)ELISA試劑盒
人輪狀病毒抗原(RV Ag)ELISA試劑盒操作步驟
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架，別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復4的操作。
8、洗板：重復5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
應用[4][5]
用于輪狀病毒不同基因型間交叉反應研究
對單價和多價輪狀病毒免疫原的免疫原性進行比較,評價單價免疫原引起的交叉保護作用與多價免疫原間的差異。
研究選取三種不同基因型的輪狀病毒標準株：Wa（基因型為G1P）,SA11（基因型為G3P）和Gottfried（基因型為G4P）,這三株輪狀病毒標準株單獨作為單價輪狀病毒免疫原,將這三株輪狀病毒標準株按照不同的比例進行混合制備成多價輪狀病毒免疫原。實驗動物ICR小鼠隨機分組為8個組,分別是3個單價輪狀病毒免疫原組（Wa組,SA11組,Gottfried組）,3個二價輪狀病毒免疫原組（Wa+SA11組,Wa+Gottfried組,SA11+Gottfried組）,1個三價輪狀病毒免疫原組（Wa+SA11+Gottfried組）以及1個對照組（PBS組）,每組按照相同的總劑量免疫輪狀病毒免疫原。
免疫后利用ELISA,中和試驗以及IgA ELISA試劑盒等方法分別對各組血清樣本中的輪狀病毒特異性IgG水平,輪狀病毒特異性中和抗體滴度以及血清IgA濃度進行檢測與評價,從而對單價和多價輪狀病毒免疫原的免疫原性進行比較分析。實驗結(jié)果顯示,單價輪狀病毒免疫原免疫后,不同基因型之間能產(chǎn)生低于親本株的血清交叉中和抗體；二價輪狀病毒免疫原誘導的免疫反應要強于單價輪狀病毒免疫原,但在二價輪狀病毒免疫原的三種組合中,對Wa株及SA11株的免疫原性強于Gottfried株；三價輪狀病毒免疫原誘導的免疫反應略高于單價輪狀病毒免疫原,而略低于二價輪狀病毒免疫原,其中免疫原性仍以Wa株最強,SA11次之,Gottfried較低。
通過以上實驗結(jié)果得出結(jié)論,多價輪狀病毒免疫原比單價輪狀病毒免疫原能夠誘導產(chǎn)生更多的血清輪狀病毒特異性抗體,產(chǎn)生的血清IgA抗體也高于單價輪狀病毒免疫原,而且,多價輪狀病毒免疫原比單價輪狀病毒免疫原能夠誘導交叉免疫反應的速度更快。
參考文獻
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[3]Efficacy of a monovalent human-bovine（116E）rotavirus vaccine in Indian children in the second year of life[J].Nita Bhandari,Temsunaro Rongsen-Chandola,Ashish Bavdekar,Jacob John,Kalpana Antony,Sunita Taneja,Nidhi Goyal,Anand Kawade,Gagandeep Kang,Sudeep Singh Rathore,Sanjay Juvekar,Jayaprakash Muliyil,Alok Arya,Hanif Shaikh,Vinod Abraham,Sudhanshu Vrati,Michael Proschan,Robert Kohberger,Georges Thiry,Roger Glass,Harry B.Greenberg,George Curlin,Krishna Mohan,G.V.J.A.Harshavardhan,Sai Prasad,T.S.Rao,John Boslego,Maharaj Kishan Bhan.Vaccine.2014
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