背景及概述[1]
溶劑紅25又叫蘇丹紅B，屬于一種偶氮染料。隨著科技的發(fā)展，越來越多的染料被應(yīng)用到各個領(lǐng)域，偶氮類染料就是其中的一種。根據(jù)偶氮基數(shù)目的多少偶氮染料可分為單偶氮染料、雙偶氮染料及多偶氮染料，多出現(xiàn)于直接染料、酸性染料、活性染料、金屬絡(luò)合染料、分散染料、陽離子染料及縮聚染料等合成染料之中，用于多種天然和合成纖維的染色和印花，以及皮毛、塑料、橡膠、陶瓷制品、油脂等的著色。偶氮類染料具有致癌性，對人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用，不可食用。但因為工業(yè)染料的價格比食用色素便宜，很多不法商販為了節(jié)省成本在有色食品中使用偶氮類染料進行染色，使得市場上很多食品的質(zhì)量得不到保證，如蘇丹黑 B 和蘇丹紅 B 常被不法商販用于食品染色。
檢測方法[1]
目前除了食品中蘇丹紅有國家標準檢測方法外，其余的偶氮類染料在食品領(lǐng)域中還沒有相應(yīng)的檢測方法。偶氮類染料在紡織品等工業(yè)產(chǎn)品中的檢測方法有薄層色譜法、液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、氣相色譜法等，薄層色譜法只能定性不能準確定量；氣質(zhì)聯(lián)用法對于一些食品中基質(zhì)比較復(fù)雜樣品的抗干擾能力比較差，有時不能準確定性和定量；液相色譜不能完全杜絕假陽性的產(chǎn)生。朱成晶等采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測黑色糧谷類食品中蘇丹紅 B，方法定性、定量準確，有利于加強食品行業(yè)的監(jiān)督，保證黑色糧谷類食品的質(zhì)量。
1.實驗方法
1.1 樣品前處理方法
稱取 2.00g樣品 (精確至0.001g) 置于 50 mL塑料離心管中，加入10 mL 正己烷飽和乙腈漩渦混勻后超聲提取 20 min，以4000 r/min 離心3 min；上清液轉(zhuǎn)移到 50 mL 磨口的玻璃離心管中，殘渣用10 mL正己烷飽和乙腈重復(fù)提取一次，離心合并兩次的提取液，用乙腈飽和正己烷 5 mL 去除油脂，以3 000r/min 離心3 min，棄去上層正己烷層，乙腈層于40℃濃縮至干。用5 mL正己烷溶解后過 Florisil固相萃取柱，用10 mL 正己烷乙酸乙酯混合溶液洗脫，氮氣吹干， 用 1 mL 乙腈水溶液溶解殘渣，過 0.22μm 的濾膜，待測。
1.2 系列標準溶液配制
準確量取蘇丹紅 B標準儲備液適量， 用乙腈配制成 200 ng/mL 的標準使用液。量取適量標準使用液，用乙腈水溶液配制成 5，10，20，40，80，100 ng／mL 系列標準工作溶液，分別進樣 20μL，進行分析。
2 結(jié)果與討論
2．1 波長選擇
配制蘇丹紅 B 標準溶液，用紫外分光光度計進行全波長掃描，結(jié)果顯示蘇丹紅 B 的吸收波長為 600 nm 時，可以得到的靈敏度，因此確定檢測波長為 600 nm。
2．2 色譜柱選擇
對幾種不同規(guī)格 (250 mm×4.6 mm，5μm；150 mm×4.6 mm，5μm ； 100 mm×4.6 mm， 3.5μm， 編號分別為 1#，2#， 3#，Agilent 公司 ) 的 C18 柱進行對照試驗，結(jié)果表明： 1# 柱在保證分離度的情況下，出峰時間較遲，峰形較寬；2# 柱出鋒時間早但分離度不好；3# 柱出峰時間適中，分離度良好，并且可以得到滿意的峰形。因此選擇 Agilent 100mm×4.6 mm，3.5 μm C18 色譜柱，柱溫為 40℃。
2． 3 流動相的選擇
分別對甲醇、乙腈、甲酸銨、乙酸銨、甲酸等流動相進行試驗，試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在使用甲醇作為流動相時有機相出峰遲，峰形寬，壓力高；使用乙腈甲酸銨 -甲酸水溶液和乙腈乙酸銨-甲酸水溶液為流動相時，峰形寬，不對稱且有拖尾；以乙腈-0.1% 甲酸水溶液 (體積比為90∶10) 作為流動相時，可以得到滿意的峰形，具有合適的分離度和出峰時間。圖1蘇丹紅 B 標準溶液的液相色譜分離圖，圖 2 為質(zhì)譜總離子流圖和選擇離子監(jiān)測圖。蘇丹紅 B 的子離子質(zhì)核比為 91.1，106，156。
2．4 樣品提取與凈化條件選擇
樣品處理時如果使用乙腈提取，正己烷去油回收率會因為乙腈和正己烷的互溶而降低，因此選擇用正己烷飽和的乙腈提取，并且去油時也采用乙腈飽和的正己烷。采用正己烷-乙酸乙酯混合溶液洗脫時，若乙酸乙酯含量過高，凈化效果較差。經(jīng)過試驗比較，采用正己烷-乙酸乙酯 (體積比為 8∶2) 提取樣品，用量為 10 mL 時凈化效果。
主要參考資料
[1]朱成晶,朱鴨梅,李穩(wěn),劉佩佩,李新麗.LC–MS/MS法檢測黑色糧谷類食品中的蘇丹黑B和蘇丹紅B[J].化學(xué)分析計量,2015,24(04):58-61.