背景[1-3]
人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人肌酸激酶（CK）的含量。
實驗原理:
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人肌酸激酶（CK）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人肌酸激酶（CK）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。
人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒
樣本處理及要求:
1.血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
操作步驟:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算:
以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
應用[4][5]
用于母體血清中CK、AFP聯(lián)合β-hCG對產(chǎn)前胎盤植入的預測價值研究
探討母體血清中肌酸激酶（Creatine kinase,CK）、甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein,AFP）及β-人絨毛膜促性腺激素（β-human chorionic gonadotropin,β-hCG）單項指標對產(chǎn)前胎盤植入（Placenta increta,PIA）的預測價值;
2. 探討母體血清中CK、AFP及β-hCG三項指標聯(lián)合預測胎盤植入的預測價值;
3.計算出母體血清中CK、AFP及β-hCG預測胎盤植入的臨界值（Cut off value,cut off值）。
方法:收集存在發(fā)生胎盤植入高危因素且以剖宮產(chǎn)終止妊娠的孕婦102例。根據(jù)術(shù)中所見及術(shù)后病理組織學診斷（子宮平滑肌中可見絨毛）分為胎盤植入組及非胎盤植入組,胎盤植入組包括胎盤粘連28例,胎盤植入20例,穿透性胎盤植入2例,共50例,即實驗組;將具有相同或相似高危因素而未發(fā)生胎盤植入的孕婦52例為非胎盤植入組,即對照組,同時隨機選擇以剖宮產(chǎn)終止妊娠而無高危因素的正常孕婦60例為空白對照組。
選擇SPSS25.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,計量數(shù)據(jù)采用（`X±s）表示,多組間比較采用單因素方差分析,繪制受試者工作特征曲線（Receiver operating characteristic curve,ROC曲線）,并計算曲線下面積（Area under curve,AUC）,得出CK、AFP及β-hCG單獨預測胎盤植入的靈敏度、特異度、診斷符合率及三者聯(lián)合預測胎盤植入的靈敏度、特異度、診斷符合率,利用約登指數(shù)計算出CK、AFP及β-hCG預測胎盤植入的cut off值。當P<0.05時,差異具有統(tǒng)計學意義。
高危因素:剖宮產(chǎn)手術(shù)史、高齡產(chǎn)婦、多次生產(chǎn)史、多次刮宮及人流等宮腔內(nèi)操作史。
結(jié)果:實驗組孕婦血清中CK、AFP及β-hCG水平顯著高于對照組及空白對照組,差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;血清CK對胎盤植入的敏感度為42.67%,特異度52.68%,診斷符合率69.72%,血清AFP對胎盤植入的敏感度為65.78%,特異度60.24%,診斷符合率71.68%,血清β-hCG對胎盤植入的敏感度為67.38%,特異度69.46%,診斷符合率73.09%,三者聯(lián)合對預測胎盤植入的靈敏度分別為:79.04%,特異度分別為:81.57%,診斷符合率80.67%;實驗組孕婦血清中CK、AFP及β-hCG預測胎盤植入的臨界值分別是128.09U/ml、270.67U/ml及28709.5U/L。
結(jié)論:1.實驗組母體血清中CK、AFP及β-hCG的水平均明顯高于對照組及空白對照組;
2.母體血清中CK、AFP及β-hCG對胎盤植入具有一定的預測價值,尤其三者聯(lián)合篩查對產(chǎn)前胎盤植入的預測價值明顯升高;
3.實驗組母體血清中CK、AFP及β-hCG預測胎盤植入的臨界值分別是128.09U/ml、270.67U/ml及28709.5U/L。
參考文獻
[1]Serum angiogenic profile in abnormal placentation[J].Ebru Biberoglu,Ayse Kirbas,Korkut Daglar,Kutay Biberoglu,Hakan Timur,Canan Demirtas,Erdem Karabulut,Nuri Danisman.The Journal of Maternal-Fetal＆Neonatal Medicine.2016(19)
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[3]Accuracy of ultrasound for the prediction of placenta accreta[J].Zachary S.Bowman,Alexandra G.Eller,Anne M.Kennedy,Douglas S.Richards,Thomas C.Winter,Paula J.Woodward,Robert M.Silver.American Journal of Obstetrics and Gynecology.2014
[4]Elevated first trimester PAPP‐A is associated with increased risk of placenta accreta[J].N.Desai,D.Krantz,A.Roman,A.Fleischer,S.Boulis,B.Rochelson.Prenat Diagn.2014(2)
[5]李紅.母體血清中CK、AFP聯(lián)合β-hCG對產(chǎn)前胎盤植入的預測價值[D].承德醫(yī)學院,2020.