背景[1-3]
大鼠內(nèi)毒素(ET)ELISA試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠內(nèi)毒素(ET)的含量。
實(shí)驗(yàn)原理:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠內(nèi)毒素(ET)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠內(nèi)毒素(ET)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。
大鼠內(nèi)毒素(ET)ELISA試劑盒
樣本處理及要求
1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。
應(yīng)用[4][5]
用于針康法對(duì)腦缺血大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)及內(nèi)毒素、二胺氧化酶、5-羥色胺表達(dá)的影響研究
察針康法對(duì)局灶性腦缺血大鼠腸道菌群、腸道黏膜屏障、缺血半暗區(qū)腦組織5-羥色胺（5-HT）表達(dá)及預(yù)后的影響。
方法：將90只雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)等分為假手術(shù)組、模型組、針刺組、康復(fù)組和針康組,每組再等分為3d、7d和14d三個(gè)亞組,每個(gè)亞組6只。除假手術(shù)組外,其余四組采用改良Koizumi線栓法制備永久性腦缺血模型。假手術(shù)組和模型組不予治療,針刺組予頭穴叢刺治療,康復(fù)組予跑臺(tái)康復(fù)訓(xùn)練,針康組同時(shí)予以上兩種治療。術(shù)后14d采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（q RT-PCR）法檢測(cè)各組大鼠腸道菌群（雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、腸球菌）變化。預(yù)定時(shí)間點(diǎn)用改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分（m NSS）檢測(cè)各組大鼠神經(jīng)功能缺損情況;酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)大鼠腸道黏膜屏障指標(biāo)血清中內(nèi)毒素（lipopolysaccharide-binding protein,LPS）、二胺氧化酶（diamine oxidase,DAO）的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)缺血半暗區(qū)腦組織中5-HT的表達(dá)。
結(jié)果1.改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分（m NSS）:術(shù)后3d,7d,14d模型組與假手術(shù)組相比較,m NSS評(píng)分升高（P<0.05）;各治療組與模型組相比較,m NSS評(píng)分降低（P<0.05）;術(shù)后7d和14d,針康組與針刺治療組和康復(fù)治療組相比較,m NSS評(píng)分均顯著下降（P<0.05）。
2. 目標(biāo)菌種數(shù)量:術(shù)后14d,模型組與假手術(shù)組相比較,乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量降低,大腸桿菌和腸球菌的數(shù)量上升（P<0.05）;各治療組與模型組相比較,乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量均上升,大腸桿菌和腸球菌的數(shù)量均降低（P<0.05）;針康組與針刺治療組和康復(fù)治療組相比較,乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著升高,大腸桿菌和腸球菌的數(shù)量均顯著降低（P<0.05）。
3. 腸粘膜屏障指標(biāo)（血清LPS、血清DAO）:血清LPS含量:術(shù)后3d,7d,14d模型組與假手術(shù)組相比較,血清LPS含量升高（P<0.05）;各治療組與模型組相比較,血清LPS含量降低（P<0.05）;術(shù)后7d和14d,針康組與針刺治療組和康復(fù)治療組相比較,血清LPS含量均顯著降低（P<0.05）。血清DAO含量:術(shù)后3d,7d,14d模型組與假手術(shù)組相比較,血清DAO含量升高（P<0.05）;各治療組與模型組相比較,血清DAO含量降低（P<0.05）;術(shù)后7d和14d,針康組與針刺治療組和康復(fù)治療組相比較,血清DAO含量均顯著降低（P<0.05）。
4.腦組織5-HT含量:術(shù)后3d,7d,14d模型組與假手術(shù)組相比較,腦組織5-HT含量降低（P<0.05）;各治療組與模型組相比較,腦組織5-HT含量升高（P<0.05）;術(shù)后3d,7d,14d,針康組與針刺治療組和康復(fù)治療組相比較,腦組織5-HT含量均顯著升高（P<0.05）。
參考文獻(xiàn)
[1]Microbiota‐gut‐brain axis:Interaction of gut microbes and their metabolites with host epithelial barriers[J].Y.Bhattarai.Neurogastroenterology＆Motility.2018(6)
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[3]Ischemic stroke damages the intestinal mucosa and induces alteration of the intestinal lymphocytes and CCL19 mRNA in rats[J].Yaning Liu,Shijian Luo,Li Kou,Chaogang Tang,Ruxun Huang,Zhong Pei,Zhendong Li.Neuroscience Letters.2017
[4]Diet-Microbiota Interactions Mediate Global Epigenetic Programming in Multiple Host Tissues[J].Kimberly A.Krautkramer,Julia H.Kreznar,Kymberleigh A.Romano,Eugenio I.Vivas,Gregory A.Barrett-Wilt,Mary E.Rabaglia,Mark P.Keller,Alan D.Attie,Federico E.Rey,John M.Denu.Molecular Cell.2016(5)
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