背景[1-3]
大鼠神經(jīng)干細胞采用胰蛋白酶消化后差速貼壁，結合神經(jīng)干細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來；細胞經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
大鼠神經(jīng)干細胞是存在于哺乳動物體內的一種具有多向分化潛能和自我更新能力的細胞，能分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞，其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的替代治療前景廣闊。
大鼠神經(jīng)干細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。
大鼠神經(jīng)干細胞
由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。神經(jīng)干細胞具有分化為神經(jīng)神經(jīng)元、星形膠質細胞和少突膠質細胞的能力，能自我更新，并足以提供大量腦組織細胞的細胞群。神經(jīng)干細胞是一類具有分裂潛能和自更新能力的母細胞，它可以通過不對等的分裂方式產(chǎn)生神經(jīng)組織的各類細胞。需要強調的是，在腦脊髓等所有神經(jīng)組織中，不同的神經(jīng)干細胞類型產(chǎn)生的子代細胞種類不同，分布也不同。
神經(jīng)干細胞作為干細胞的一種，它具有其它所有干細胞的基本特征：具有自我維持和自我更新能力，具有多種分化潛能，具有分化為本系統(tǒng)大部分類型細胞的能力，這種自我更新和分化潛能可以維持相當長的時間甚至終生，對損傷和疾病具有反應能力。神經(jīng)干細胞在疾病、損傷狀態(tài)下具有增殖、遷移，并向神經(jīng)細胞、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化的能力，已成為神經(jīng)系統(tǒng)損傷修復和再生研究的熱點，體外建立穩(wěn)定的神經(jīng)干細胞培養(yǎng)模型是其基礎和臨床應用的前提。
神經(jīng)干細胞在培養(yǎng)3-4d后，可形成神經(jīng)球，神經(jīng)球在培養(yǎng)基中呈懸浮生長，予以更換半量培基，1周后用吸管輕柔吹打球形克隆成為小的神經(jīng)球和單細胞懸液，將部分細胞接種到新的培養(yǎng)瓶中，每7-10d傳代1次，每隔3d離心更換半量培養(yǎng)基1次，培養(yǎng)條件不變。
應用[4-5]
大鼠神經(jīng)干細胞可以用于敲低甘油二酯激酶γ對大鼠神經(jīng)干細胞遷移的影響及機制
探究敲低甘油二酯激酶γ(DGKγ)對神經(jīng)干細胞(NSCs)遷移的影響及相關機制。
方法:原代培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細胞,分別經(jīng)DGKγ-sh RNA慢病毒感染(DGKγ-sh RNA組)、DGKγ抑制劑R59949(R59949組)和PKC激動劑PMA(PMA組)處理,設Scramble慢病毒感染的Scramble組、培養(yǎng)基僅添加溶劑的Vector組和未做任何處理的Control組為對照。用Transwell小室遷移實驗和顯微測量NSCs水平遷移距離方法檢測各組NSCs的遷移能力變化,Western blotting法檢測PKCδ、PKCγ、ERK1/2磷酸化程度,ELISA法檢測甘油二酯(DAG)含量的變化。
結果:經(jīng)DGKγ-sh RNA慢病毒感染的大鼠神經(jīng)干細胞,DGKγ表達顯著低于Scamble組(P<0.001)。與Scramble組或Vector組相比,DGKγ-sh RNA組、R59949組和PMA組細胞Transwell小室縱向遷移數(shù)量均顯著減少(均P<0.001),水平遷移距離也均顯著縮短(均P<0.001)。Western blotting檢測PKCγ、PKCδ、ERK1/2磷酸化程度,結果顯示:與Scramble組或Vector組相比,DGKγ-sh RNA組、R59949組和PMA組p-PKCδ/PKCδ值和p-ERK1/2/ERK1/2值顯著增高(均P<0.001),p-PKCγ/PKCγ值在DGKγ-sh RNA組和R59949組增高不明顯(均P>0.05),但在PMA組顯著降低(P<0.001)。ELISA法檢測大鼠神經(jīng)干細胞內DAG含量,顯示各實驗組DAG含量均明顯高于Scramble組或Vector組(DGKγ-sh RNA,P<0.05;R59949,P<0.01;PMA,P<0.001)。
結論:DGKγ低表達可降低NSCs遷移能力,DGKγ的酶活性中心與大鼠神經(jīng)干細胞遷移有關,DGKγ通過DAG/PKCδ/ERK途徑調節(jié)NSCs遷移。
參考文獻
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