背景^[1-3]

TE-10人食管癌細(xì)胞系來源于患有食管鱗癌的58歲男性患者，是一種高度分化的食管鱗狀癌，TE-10細(xì)胞不能移植到裸鼠體內(nèi)。TE-10人食管癌細(xì)胞源自原位直腸腺癌，和SW620細(xì)胞源自同一病人一年后的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。CSAp和直腸抗體3陰性；角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。p53基因第273位密碼子的G→A突變引起Arg→His替代，309位密碼子的C→T突變導(dǎo)致。

TE-10人食管癌細(xì)胞系是一種用于科學(xué)研究的細(xì)胞系，該細(xì)胞系是從人食管癌組織中分離并建立的。TE-10細(xì)胞系可用于研究食管癌的發(fā)生、發(fā)展和治療方法等方面的研究。

TE-10人食管癌細(xì)胞系

該細(xì)胞系的特點(diǎn)是其具有穩(wěn)定的生長特性和明確的生物學(xué)特性，能夠長期傳代培養(yǎng)。TE-10細(xì)胞系已被廣泛用于食管癌的基礎(chǔ)研究和藥物篩選等領(lǐng)域。

TE-10人食管癌細(xì)胞系是一種來源于人類食管上皮細(xì)胞的癌細(xì)胞系，其名稱為“TE-10”或“Tet-On”食管癌細(xì)胞系。這種細(xì)胞系最初是在1975年從一名患有晚期食管癌的患者身上分離出來的，隨后被廣泛應(yīng)用于研究食管癌的發(fā)生、發(fā)展和治療等方面。

TE-10人食管癌細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

1.高度惡性：TE-10人食管癌細(xì)胞系是一種高轉(zhuǎn)移性的癌細(xì)胞系，能夠在不同的組織和器官中形成轉(zhuǎn)移灶。

2.易于培養(yǎng)：與其他類型的癌細(xì)胞相比，TE-10人食管癌細(xì)胞系更容易從原代培養(yǎng)到傳代培養(yǎng)，并且對生長條件的要求相對較低。這使得它們在實(shí)驗(yàn)室中的操作相對簡單。

3.遺傳特性穩(wěn)定：TE-10人食管癌細(xì)胞系的基因組相對穩(wěn)定，有利于研究基因功能和調(diào)控機(jī)制。此外，該細(xì)胞系的生命周期較短，便于長期觀察細(xì)胞的生物學(xué)行為。

應(yīng)用^[4][5]

TE-10人食管癌細(xì)胞系可以用于CLDN-1上調(diào)MMP-1的表達(dá)促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞TE10侵襲及轉(zhuǎn)移

研究緊密連接蛋白(Claudin-1,CLDN-1)在食管鱗癌細(xì)胞TE-10中的生物學(xué)功能及機(jī)制。

方法:經(jīng)過在體外培養(yǎng)人食管鱗癌細(xì)胞(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)細(xì)胞株TE-10人食管癌細(xì)胞系,收集在對數(shù)生長期的TE-10人食管癌細(xì)胞系,種于24孔板。體外構(gòu)建過表達(dá)慢病毒Lv-GFP-Puro-CLDN-1,根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要將TE-10細(xì)胞株分為2組。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到70%-80%時(shí)開始感染,按照感染復(fù)數(shù)(Multiplicity of infection,MOI)=20的比例感染TE-10人食管癌細(xì)胞系。過表達(dá)組(感染慢病毒Lv-GFP-Puro-CLDN-1),陰性對照組(感染慢病毒空載體)。感染后的TE-10人食管癌細(xì)胞系應(yīng)用嘌呤霉素進(jìn)行篩選,以獲得穩(wěn)定高表達(dá)CLDN-1組的穩(wěn)定TE-10人食管癌細(xì)胞系。通過熒光顯微鏡和蛋白質(zhì)印跡(Western-blot)對表達(dá)效率進(jìn)行鑒定。

過表達(dá)CLDN-1的TE-10人食管癌細(xì)胞系構(gòu)建成功后采用細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)分別檢測兩組TE-10人食管癌細(xì)胞系增殖能力發(fā)生的變化,采用遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)(Tanswell)測定兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組中腫瘤細(xì)胞遷移與侵襲能力的改變。通過mRNA芯片技術(shù)分析了CLDN-1過表達(dá)組TE-10人食管癌細(xì)胞系和相應(yīng)陰性對照組的mRNA表達(dá)譜改變,分析下游靶基因。根據(jù)基因芯片分析結(jié)果,確定下游的靶基因,運(yùn)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Polymeras Chain Reaction PCR)檢測下游靶基因mRNA的表達(dá)情況。

并通過蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)檢測下游靶基因的蛋白表達(dá)水平,同時(shí)通過感染慢病毒干擾下游靶基因的表達(dá),進(jìn)行功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)研究CLDN-1對下游靶基因的表達(dá)調(diào)控。結(jié)果:感染Lv-GFP-Puro-CLDN-1慢病毒載體48 h后,使用熒光顯微鏡(100×)對GFP的表達(dá)情況進(jìn)行觀察顯示:視野下TE-10細(xì)胞均勻發(fā)出綠色熒光,其陽性細(xì)胞數(shù)在90%以上,感染效率滿足實(shí)驗(yàn)要求。

Western blot結(jié)果顯示,與陰性對照相比較,CLDN-1過表達(dá)組的CLDN-1蛋白表達(dá)(8.13±0.70)明顯升高(t=22.95,P<0.05),表明過表達(dá)CLDN-1的TE-10細(xì)胞構(gòu)建成功。CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:CLDN-1過表達(dá)組TE-10細(xì)胞在48 h,72 h時(shí)的吸光度值分別為(0.71±0.012)和(1.10±0.05),而陰性對照組細(xì)胞在48 h,72 h時(shí)的吸光度值分別為(0.48±0.03)和(0.76±0.03)。

CLDN-1過表達(dá)組TE-10細(xì)胞的吸光值明顯高于陰性對照組細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,48 h:t=5.529,72 h:t=7.829)。這一結(jié)果表明:過表達(dá)CLDN-1能夠促進(jìn)TE-10細(xì)胞的增殖活性。遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:CLDN-1過表達(dá)組的穿膜細(xì)胞(54.8±3.4)明顯高于陰性對照組(24.6±2.1),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.038,P=0.008,P<0.05);侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,CLDN-1過表達(dá)組的穿膜細(xì)胞數(shù)(34.5±2.6)明顯高于陰性對照組(11.5±1.6),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.325,P=0.0011,P<0.05)。Tanswell結(jié)果說明:通過上調(diào)CLDN-1基因的表達(dá)可以促進(jìn)TE-10人食管癌細(xì)胞系的遷移和侵襲能力。

信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)芯片分析發(fā)現(xiàn),過表達(dá)CLDN-1可以促進(jìn)食管鱗癌TE-10細(xì)胞的基質(zhì)金屬蛋白酶家族(Matrix metalloproteinases,MMPs)基因的表達(dá)。芯片分析表明CLDN-1共調(diào)控了23個(gè)MMPs家族基因的表達(dá),包括:MMP-1,MMP-12,MMP-10等。表達(dá)倍數(shù)最高的為MMP-1,其基因相對表達(dá)水平達(dá)到10.25倍,明顯上調(diào)(P<0.05)。

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