背景^[1-3]

PC-14人肺腺癌細(xì)胞系是一種來(lái)源于人肺腺癌的細(xì)胞系。它是一種常用的實(shí)驗(yàn)材料，被廣泛用于研究腫瘤生物學(xué)、藥物篩選和治療策略等領(lǐng)域。

PC-14人肺腺癌細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)：

高度增殖：PC-14人肺腺癌細(xì)胞系具有快速增殖的能力，可以在體外培養(yǎng)條件下快速生長(zhǎng)。

多藥耐藥性：PC-14人肺腺癌細(xì)胞系對(duì)多種化療藥物表現(xiàn)出耐藥性，這使得它成為研究腫瘤耐藥機(jī)制的重要模型。

可移植性：PC-14人肺腺癌細(xì)胞系可以通過(guò)移植到小鼠體內(nèi)來(lái)研究腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移情況。

PC-14人肺腺癌細(xì)胞系可以通過(guò)多種方法進(jìn)行培養(yǎng)和擴(kuò)增，包括貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和三維培養(yǎng)等。此外，它還可以被用于制備腫瘤疫苗、基因治療和藥物篩選等實(shí)驗(yàn)。PC-14人肺腺癌細(xì)胞系是一種來(lái)源于人類肺腺癌的細(xì)胞系，通常用于研究肺癌的生物學(xué)特性和治療機(jī)制。該細(xì)胞系具有特定的形態(tài)和生物學(xué)特性，如細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期等，可以用于研究肺癌的發(fā)生、發(fā)展和治療等方面的研究。

PC-14人肺腺癌細(xì)胞系

PC-14人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞培養(yǎng)操作:

1)復(fù)蘇PC-14人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)PC-14人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)PC-14人肺腺癌細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

應(yīng)用^[4-5]

PC-14人肺腺癌細(xì)胞系可以用于CUGBP1表達(dá)對(duì)肺癌轉(zhuǎn)移、增殖的影響

初步探討CUGBP1表達(dá)對(duì)肺癌增殖、轉(zhuǎn)移的影響。

方法：將PC-14人肺腺癌細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,運(yùn)用傳代培養(yǎng)消化法進(jìn)行培養(yǎng),構(gòu)建慢病毒CUGBP1-sh RNA、CUGBP1-c DNA為表達(dá)載體。分別利用上述c DNA和sh RNA慢病毒轉(zhuǎn)染PC-14人肺腺癌細(xì)胞系,將CUGBP1作為控制變量,上調(diào)及下調(diào)其表達(dá)。用RT-PCR及western blot方法,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,檢測(cè)不同細(xì)胞系中CUGBP1的不同表達(dá)。通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(基底膜侵襲實(shí)驗(yàn))、粘附實(shí)驗(yàn)、Transwell等方法,研究不同因子相互調(diào)節(jié)對(duì)于肺癌轉(zhuǎn)移、增殖功能的影響。由細(xì)胞學(xué)層面上初對(duì)步探索CUGBP1表達(dá)同肺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的相關(guān)性。結(jié)果肺癌患者CUGBP1mRNA和蛋白過(guò)表達(dá)與轉(zhuǎn)移、增殖相關(guān),是肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子,CUGBP1的作用是一個(gè)多基因協(xié)同作用的復(fù)雜現(xiàn)象。結(jié)論CUGBP1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致肺癌轉(zhuǎn)移、增殖能力增強(qiáng),其參與了肺癌細(xì)胞的生物學(xué)反應(yīng)。

參考文獻(xiàn)

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