背景及概述[1]
核酸酶是一類催化核苷酸和核酸中的磷酸二酯鍵水解的酶，分內(nèi)切核酸酶(endonucleases)和外切核酸酶(ex-onucleases)，對紫外線引起的DNA大型光損傷和各種化學(xué)物與DNA形成的加合物的切除修復(fù)中起作用。在N-糖基化酶切除異常的堿基形成AP位點(diǎn)(見切除修復(fù))后，如插入酶將正確的堿基插入AP位點(diǎn)仍不能達(dá)到完全修復(fù)時，即由AP內(nèi)切核酸酶在AP位點(diǎn)或其旁邊的5′端將DNA切開一個缺口，使一端成為5′-磷酸基，另一端成為3′-OH基。隨之外切核酸酶再切除一些堿基。除AP內(nèi)切核酸酶外，還有一些對某些DNA損傷有特異性的內(nèi)切核酸酶。其中較特殊的是切除由紫外線產(chǎn)生的嘧啶二聚體的UV內(nèi)切核酸酶。它有時還能作用于許多較大的螺旋扭曲變形損傷。由于UV內(nèi)切核酸酶還具有外切作用，有時稱之為“切除核酸酶”(ex-cinuclease)。參見切除修復(fù)、聚合和連接酶。
Benzonase核酸酶，是一種核酸內(nèi)切酶，可將核酸降解成2~5個堿基的5‘單磷酸核苷酸，因其能高效降解任何形式（雙鏈，單鏈，線狀，環(huán)狀）的DNA和RNA而沒有蛋白裂解活性，又被稱為“全能核酸酶”。Benzonase核酸酶能有效降低蛋白樣品粘度，去除蛋白樣品中核酸的污染，且無蛋白酶活性殘留和內(nèi)毒素污染，核酸酶活性達(dá)1×106U/mg蛋白。Benzonase核酸酶在降低粘性的同時，也具有多種其他用途，如：減少了樣品處理時間，增加了蛋白產(chǎn)量，離心時時沉淀和上清分離的更徹底，更便于溶液的離心（尤其是超濾）；提高色譜純化的效率等。
應(yīng)用[1]
1）蛋白提取時去除核酸污染：在重組蛋白純化或組織細(xì)胞樣品蛋白提取時，Benzonase核酸酶可有效降低樣品粘度，利于下游操作
2）與細(xì)胞或細(xì)菌裂解液配合使用，去除粗提物中的核酸，降低溶液粘性，提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量
3）減少存放的外周血單細(xì)胞(PBMC)的結(jié)塊現(xiàn)象
4）降解核酸，利于不可溶性蛋白復(fù)性前高質(zhì)量包涵體制備
5）有效去除帶負(fù)電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響，改善蛋白質(zhì)的分離效果，增強(qiáng)2-DE分辨率
6）疫苗和病毒樣品制備中DNA污染的去除
主要參考資料
[1] 衛(wèi)生學(xué)大辭典