背景及概述[1]
連接酶是一種能催化兩個(gè)不同或相同分子的兩端相連接的酶，此反應(yīng)與ATP分解反應(yīng)相偶聯(lián)。對于DNA損傷切除修復(fù)最后一步有連接功能的是DNA連接酶。該酶特異地催化兩條DNA單鏈片段相聯(lián)結(jié)，也就是將DNA聚合酶重新合成的DNA補(bǔ)片連接到切除了DNA損傷的缺口的兩端。DNA連接酶還在復(fù)制和重組等過程中出現(xiàn)斷裂時(shí)有連接作用。很可能該酶還能對誘變劑(化學(xué)斷裂劑和電離輻射)所產(chǎn)生的DNA鏈斷裂有直接的連接作用，只要斷端是5′-PO4和3′-OH，而且兩斷端相近又易拉攏。所以DNA連接酶有時(shí)能一步完成DNA鏈斷裂的修復(fù)。對于DNA雙鏈斷裂，則似乎不是由DNA連接酶直接修復(fù)，而是先由RecA蛋白質(zhì)在DNA兩斷端之間形成細(xì)絲使兩端對準(zhǔn)。在某種情況下，DNA斷裂需要先由外切核酸酶形成一個(gè)空源，再由DNA聚合酶合成補(bǔ)片，然后才連接。
PBCV DNA連接酶也稱為SplintR連接酶或Chorella病毒DNA連接酶，它能夠高效催化相鄰的DNA核苷酸的連接，這個(gè)連接過程需要一條互補(bǔ)的RNA在兩條DNA單鏈間起“夾板”或“橋梁”的固定作用。PBCV DNA連接酶的這種活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)的T4DNA連接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在內(nèi)的研究方法的創(chuàng)新。另外，在二代測序和分子診斷等眾多領(lǐng)域中，PBCV DNA連接酶是富集目的基因的理想選擇。它具有穩(wěn)定的生物活性，對RNA介導(dǎo)固定的DNA底物親和性強(qiáng)（米氏常數(shù)Km=1nM），能夠在復(fù)雜的混合物中檢測到亞納摩爾級的特定RNA。因此，在RNA檢測技術(shù)中，PBCV DNA連接酶不失為選擇用酶。PBCV DNA連接酶主要用于單鏈DNA的連接、基于探針法的miRNA的檢測、SNP或剪接體的檢測、RASL分析。
主要參考資料
[1] 衛(wèi)生學(xué)大辭典