背景[1-6]
細胞流式檢測服務是一種在液體系統(tǒng)中，快速測定單個細胞或細胞器的生物、物理和化學特性，并根據這些特性將所需要的細胞或細胞器進行定量分析和分選的技術。它是一種可以快速、準確的檢測細胞或者生物學顆粒的多種特性的技術，用來了解細胞群的均值和分布情況，并還可以分選感興趣的細胞、對該細胞做進一步的培養(yǎng)研究。
傳統(tǒng)上，根據胞外或表面表達的標志物不同，流式細胞術可用于鑒定多種細胞匯集池內不同的細胞類型，這種應用通常稱為免疫表型分型。然而，這項技術還可輕松地應用于胞內靶標檢測，并可成功地應用于復雜信號轉導事件的研究。流式細胞術(flow cytometry,FCM)是一項新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學分析技術,它是集激光技術、光電測量技術、計算機技術、流體力學以及細胞免疫熒光化學技術、單克隆抗體技術為一體的新型高科技細胞分析技術。
流式細胞儀是應用流式細胞術建立起來的儀器裝置。它使細胞或微粒在液流中流動,逐個通過一入射光束,并用高靈敏度檢測器記錄下散射光及各種熒光信號,從而得以對粒子進行多參數分析,包括諸如粒子形狀和大小、細胞周期、細胞內細胞因子、細菌表面抗原、細胞DNA內含物等。FCM檢測的粒子一般為活性細胞,通過激光光源激發(fā)細胞上所標記的熒光物質的強度和顏色以及散射光的強度可以得到細胞內部各種各樣的生物信息。
另外FCM還可進行細胞分選,可以根據所檢測細胞的某種性質進行分選,并且如果分選的過程是在無菌條件下進行的,這些細胞還可以用來培養(yǎng)。流式細胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經熒光標記的細胞或微粒逐個通過樣品池，同時由熒光探測器捕獲熒光信號并轉換成分別代表前向散射角、側向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號，經計算機處理形成相應的點圖，直方圖和加三維結構圖像進行分析。
檢測范圍：
細胞結構：細胞大??；細胞顆粒度；細胞表面積；核漿比例；DNA含量與細胞周期；蛋白質含量
細胞功能：細胞表面/胞漿/核的特異性抗原；細胞活性；細胞內外的細胞因子；激素結合位點；細胞受體；蛋白磷酸化；pH值；鈣離子濃度；細胞膜電位/線粒體膜電位
用于FCM的樣本是單細胞懸液，可以是血液、懸浮細胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實體瘤的單細胞懸液以及石蠟包埋組織的單細胞懸液等。
服務內容：
1.細胞表面分子的檢測與分析;
2.細胞內或細胞核內抗原檢測與分析——如胞內細胞因子、調節(jié)性T細胞(Treg，CD4+CD25+Foxp3+);
3.細胞凋亡的檢測與分析——如PI單染法、Annexin-V-PI復染法、末端轉移酶標記技術(TUNEL)、細胞周期特異性細胞凋亡的檢測(PI-Annexin-V，PA法);
4.DNA含量檢測與細胞周期的分析——如藥物對細胞周期的影響、流式細胞核型分析;
5.細胞增殖的檢測與分析。
應用[7][8]
細胞流式檢測服務可用于白血病外周血細胞檢測對急性白血病復發(fā)判斷：
將流式細胞術應用于白血病外周血細胞檢測對急性白血病患者復發(fā)狀況的判斷效果。對所有實驗對象采用流式細胞術進行外周血標本檢測,并做好相應的骨髓細胞形態(tài)學實驗。分析流式細胞術對急性髓系白血病和急性淋巴白血病檢驗中的特異性和敏感性。結果流式細胞術對急性髓系白血病患者的診斷敏感性為96.00%,特異性為36.00%;流式細胞術對急性淋巴白血病檢驗的敏感性為79.49%,特異性為41.03%。
所有患者中診斷結果中包括63例陽性和26例陰性患者,陽性復發(fā)率為82.54%,陰性復發(fā)率為23.08%,結果中可見陽性患者的復發(fā)率較陰性患者明顯更高,差異顯著(P<0.05)。結論將流式細胞術應用于白血病患者外周血細胞檢測中,對于急性白血病患者的診斷有較好的敏感性,并且對于患者的復發(fā)率進行評估具有積極意義,是一種有效的評估方案,值得在臨床上推廣使用。
參考文獻
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