背景及概述[1][2]
連翹為木犀科連翹屬落葉灌木，是常用藥材，傳統(tǒng)以果實入藥，但民間調查顯示，連翹葉有消除便秘，預防感冒，降血脂，降血壓等作用。國內己有研究者對連翹葉的化學成分進行了初步分析，并利用連翹葉制成茶葉作為滋補調理飲料應用。連翹葉常作為保健茶使用，化學研究證明，葉子中的有效生物活性成分如連翹苷、異連翹酯苷的含量遠高于連翹果實。
連翹苷和異連翹酯苷是國家藥典2010年版規(guī)定的連翹質量控制指標成分。異連翹酯苷有較好的抗病毒和抗氧化作用，對金黃色葡萄球菌等多種致病菌具有抑制作用，還能抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧；在醫(yī)藥和食品領域作為天然藥物、天然防腐劑、天然抗氧化劑均具有很廣泛的應用前景。
理化性質及結構[1]
異連翹酯苷為咖啡酸的衍生物，分子結構中具有酯鍵和糖苷鍵，在酸、堿和高溫條件下不穩(wěn)定，易引起分解產(chǎn)生咖啡酸、D-葡萄糖、L-鼠李糖和一次級苷。因而在加工含有連翹的中成藥時，加工條件稍有不當，就有可能使異連翹酯苷分解。事實也證實了這一點，雖然異連翹酯苷在連翹葉、殼及芯中含量都很高，但在檢測銀翹解毒丸、銀翹解毒片成藥時只檢出咖啡酸，未檢出異連翹酯苷，可能在加工過程中異連翹酯苷已發(fā)生了水解。
異連翹酯苷
應用[3]
1.抗菌作用
王宏軍等研究發(fā)現(xiàn)異連翹酯苷在體外和體內實驗中對金黃色葡萄球菌和鏈球菌均有較好的抑制作用。馮淑怡等發(fā)現(xiàn)異連翹酯苷在小(0.25g/kg)、中(0.5g/kg)、大(1.0g/kg)3個劑量組對綠膿桿菌、大腸桿菌和金色葡萄球菌均具有很強的抑制活性，且相同劑量下對大鼠酵母發(fā)熱模型和家兔內毒素發(fā)熱模型具有良好的解熱作用。異連翹酯苷對革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、綠膿桿菌所致的感染有很好的對抗作用，可能與其抗內毒素的作用相關。
2.抗病毒作用
α干擾素(IFN-α)是具有抗病毒、免疫調節(jié)和抗細胞增殖的蛋白質，與細胞表面受體結合后，激活細胞內的抗病毒蛋白，誘導細胞產(chǎn)生降解病毒mRNA的蛋白激酶，干擾翻譯過程，從而抑制病毒。毛東有等發(fā)現(xiàn)異連翹酯苷能夠誘導小鼠產(chǎn)生IFN-α，并在48h達到最高。
胡克杰等通過體外試驗研究顯示，異連翹酯苷對合胞病毒、腺病毒3型和7型、柯薩奇病毒B組3型和7型均有一定的抑制作用，并且能誘生人外周血白細胞中IFN-α，達到多種免疫調節(jié)作用，同其抗病毒、抑菌作用。馬元元等通過將不同濃度的異連翹酯苷分別作用于感染PCV2的小鼠模型后，研究其對IFN-α和抗病毒蛋白Mx1表達的影響。結果表明異連翹酯苷能顯著上調IFN-α和Mx1的表達，并在給予高劑量藥物后12h發(fā)揮顯著的抗病毒作用。
3.抗氧化作用
研究發(fā)現(xiàn)異連翹酯苷具有較強的清除活性氧(·OH、H2O2和O2-)的能力，并且其可以抑制脂質過氧化產(chǎn)物MDA的生成，對肝微粒體的脂質過氧化有一定的抑制作用，表明異連翹酯苷具有很強的清除活性氧的能力，是一種有效的天然抗氧化劑。劉金等發(fā)現(xiàn)異連翹酯苷對·OH引發(fā)的DNA損傷有保護作用。
4.利膽作用
楊美蘭等通過采用膽管引流法，觀察異連翹酯苷對正常麻醉大鼠膽汁流量的影響，并分別測定膽汁中主要成分。實驗結果顯示異連翹酯苷可顯著增加麻醉大鼠膽汁的流量，呈現(xiàn)比較明顯的量效關系，但對膽汁成分影響不明顯。表明異連翹酯苷有明顯的利膽作用。
5.抑制彈性蛋白酶活力作用
彈性蛋白酶是一種水解酶，主要存在于人體的中性粒細胞及肺泡巨噬細胞，具有降解膠原蛋白、彈性蛋白等多種蛋白質的能力，體內彈性蛋白酶過多可能是導致肺氣腫的主要原因。張立偉等以瓊脂擴散測定法研究異連翹酯苷對豬胰彈性蛋白酶(PPE)的抑制作用，結果表明異連翹酯苷對彈性蛋白酶具有抑制作用，并隨著異連翹酯苷濃度的增加對彈性蛋白酶抑制作用加強。
6.免疫調節(jié)作用
LiuDL等通過實驗發(fā)現(xiàn)forsythosideA能顯著促進ConA誘導的淋巴細胞轉化，提示其具有增強免疫作用。
7.松弛血管作用
從連翹中分離得到的具有血管松弛作用的成分是異連翹酯苷，其松弛作用呈濃度依賴性增強，其對NE所致血管收縮的抑制作用部分與阻滯受體激活鈣通道(ROC)有關。綜上所述，異連翹酯苷的藥理作用比較廣泛，主要藥理活性是抗菌、抑制病毒等作用，臨床應用十分廣泛，療效確切，毒副作用低，并且我國連翹資源非常豐富，異連翹酯苷在連翹中的含量也較高。在抗生素濫用，重大傳染性疾病時有發(fā)生的當前，異連翹酯苷具有十分良好的研究前景，尤其在新藥開發(fā)方面具有更加深入研究和探索的價值。
制備 [2]
（1）提取
將40g連翹葉粉碎至50目，用1000mL體積濃度為55%的乙醇70℃浸提50分鐘，連翹葉與乙醇的料液比為1：25g/mL，過濾，濾渣再加入800mL體積濃度為55%的乙醇70℃浸提50分鐘，合并2次的浸提液，靜置12小時，過濾，55℃減壓濃縮回收乙醇，得濃縮液665mL，按照每100mL濃縮液中添加5mL無水乙醇的量向濃縮液中加入33.25mL無水乙醇，室溫靜置12小時，過濾，得到連翹葉提取液。
（2）樹脂分離
將連翹葉提取液通過72g體積為2.6cm（直徑）×25cm（柱高）的AB?8大孔吸附樹脂柱吸附，連翹葉與AB?8大孔吸附樹脂的質量比為1﹕1.8，用1000mL水洗雜質，用725mL體積濃度為30%的乙醇洗脫，洗脫流速為2BV/h，得到餾分Ⅰ，用700mL體積濃度為50%的乙醇洗脫，洗脫流速為2BV/h，得到餾分Ⅱ。
（3）沉淀分離
將餾分Ⅰ50℃減壓濃縮回收乙醇，得餾分Ⅰ濃縮液70mL，室溫靜置至沉淀物與水層分離，沉淀物為0.282g蘆丁粗品，水層為70mL異連翹酯苷粗提液，用水飽和的正丁醇萃取2次，回收正丁醇，余液在50℃烘箱干燥，得到4.76g異連翹酯苷粗品；將餾分Ⅱ50℃減壓濃縮回收乙醇，得餾分Ⅱ濃縮液70mL，室溫靜置，分離沉淀得到0.735g連翹苷粗品。
（4）純化
將0.735g連翹苷粗品和0.282g蘆丁粗品分別用無水乙醇重結晶3次，干燥，得到純度95%的0.128g連翹苷和94%的0.149g蘆??；將4.76g異連翹酯苷粗品用8cm（直徑）×50cm（柱高）的C18反相硅膠柱層析分離，用體積濃度為30%的甲醇溶解粗品，用3倍反相硅膠柱柱床體積的濃度為30%的甲醇平衡，用體積濃度為40%的甲醇洗脫，經(jīng)薄層層析法確定，當洗脫到7000mL時開始收集異連翹酯苷A洗脫峰，收集體積為3360mL，38℃減壓濃縮回收甲醇，余液冷凍干燥，得2.557g純度為93%的異連翹酯苷。
主要參考資料
[1] 周偉, 狄留慶, 畢肖林, 陳樂天, & 杜秋. (2010). 在體腸循環(huán)法研究連翹酯苷a的腸吸收機制. 藥學學報(11), 1373-1378.
[2] 張煒, 楊繼斌, & 張漢明. (1999). Hplc法測定感冒退熱顆粒(沖劑)中連翹酯苷a的含量. 中草藥, 30(4), 268-270.
[3] 曲歡歡, 翟西峰, 李白雪, & 孫文基. (2008). 連翹不同部位中連翹酯苷和連翹苷的含量分析. 藥物分析雜志, 15(3), 382-385.