背景及概述^[1]

細(xì)胞低溫凍存液又叫細(xì)胞凍存液。目前細(xì)胞的低溫保存需要添加冷凍保護劑，如果直接冷凍細(xì)胞內(nèi)會產(chǎn)生冰晶對細(xì)胞造成傷害從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。冷凍保護劑包括滲透性冷凍保護劑和非滲透性冷凍保護劑，其中，滲透性冷凍保護劑對細(xì)胞凍存起到重要的作用，包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇、丙醇、和甲酰胺等。

滲透型冷凍保護劑能夠穿過細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi)，其中最常用的就是DMSO，DMSO能夠滲透到細(xì)胞內(nèi)增大胞內(nèi)滲透壓，降低冰點，延緩凍存過程。但是DMSO對細(xì)胞存在一定的毒性，在一些臨床治療案例中，注射了含有DMSO的細(xì)胞的病人表現(xiàn)出惡心、頭痛、高血壓和腹部絞痛等癥狀。因此，對于臨床治療的細(xì)胞應(yīng)該盡量減少DMSO的用量，或?qū)⑵涮鎿Q為一種更安全的冷凍保護劑。

目前已經(jīng)有一些公司生產(chǎn)出不含DMSO成分的凍存液，例如，日本全藥工業(yè)株式會社生產(chǎn)的GMP級無血清無DMSO的細(xì)胞凍存液，其冷凍保護劑為1，2--丙二醇，雖然毒性較低，但制造商研制過程中從未用它測試過治療用的細(xì)胞類型。

專利EP2305792A公開的技術(shù)使用了不含動物源成分、不含DMSO的細(xì)胞凍存液，使用安全無毒的琥珀酰-ε-多聚賴氨酸作為冷凍保護劑替代有毒的DMSO，沒有引入任何動物源性物質(zhì)，減少了污染的幾率。但是其所公開的細(xì)胞凍存液在長時間保存細(xì)胞時對細(xì)胞造成一定程度的損傷，細(xì)胞存活率有待進(jìn)一步提高。

簡介^[1]

CN201811072202.1提供一種細(xì)胞凍存液，實現(xiàn)細(xì)胞凍存液的安全無毒、進(jìn)一步提高細(xì)胞存活率。本發(fā)明的所述細(xì)胞凍存液，包含?；?epsilon;-多聚賴氨酸、多元醇和平衡緩沖液。本發(fā)明所述細(xì)胞凍存液，其有益效果在于：所述細(xì)胞凍存液包含?；?epsilon;-多聚賴氨酸和多元醇，替代了有毒性的DMSO作為冷凍保護劑，穩(wěn)定性好，無毒副作用，與已有的琥珀酰-ε-多聚賴氨酸凍存液相比，添加所述多元醇，能夠進(jìn)一步減小凍存復(fù)蘇過程中對細(xì)胞的損傷，提高細(xì)胞存活率。

使用所述細(xì)胞凍存液進(jìn)行細(xì)胞凍存復(fù)蘇的方法，包含以下步驟：

S1:取待凍存細(xì)胞懸液，離心收集細(xì)胞，用所述細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度，獲得細(xì)胞懸液；

S2:吸取所述細(xì)胞懸液分裝于凍存管或凍存袋中，然后將所述凍存管或凍存袋凍存；

S3:取出所述凍存管或凍存袋，在30-40℃的條件下對所述凍存管或凍存袋進(jìn)行解凍處理，得到復(fù)蘇后的細(xì)胞。

主要參考資料

[1] CN201811072202.1 細(xì)胞凍存液、凍存復(fù)蘇方法及其應(yīng)用