背景[1-3]
細(xì)胞刮刀采用熱塑性彈性體（TPE）材質(zhì)，對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷極低，可最大程度保持細(xì)胞的活性和完整性。刀柄為ABS塑料制成，具備優(yōu)良韌性，更耐彎折，適用于多種實(shí)驗(yàn)環(huán)境。
細(xì)胞刮刀表面是一個(gè)新型的細(xì)胞培養(yǎng)處理表面，增加了表面濕潤(rùn)的持久性和細(xì)胞吸附的穩(wěn)定性超低吸附板的特征是共價(jià)結(jié)合的水凝膠層將細(xì)胞吸附、蛋白吸附和細(xì)胞的激活降到較低具有凝聚環(huán)的不可逆的蓋減少污染，統(tǒng)一邊角方便堆放帶有字母單孔識(shí)別，平底經(jīng)過細(xì)胞吸附化處理經(jīng)過伽馬射線滅菌，經(jīng)過無熱源認(rèn)證。
細(xì)胞刮刀的刀片是由高分子材料TPE制成，長(zhǎng)柄是由高分子材料ABS制成，主要是適用于收獲細(xì)胞，其優(yōu)化設(shè)計(jì)，確保對(duì)細(xì)胞損傷，并盡可能接觸細(xì)胞生長(zhǎng)的所有器皿表面。用于人工收獲細(xì)胞，優(yōu)化設(shè)計(jì)確保對(duì)細(xì)胞較小的傷害并盡可能接觸細(xì)胞生長(zhǎng)的所有表面。細(xì)胞刮刀常用于從培養(yǎng)皿中收獲細(xì)胞。
細(xì)胞刮刀
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、改進(jìn)的Falcon細(xì)胞刮刀以理性化設(shè)計(jì)最大可能的接觸各種培養(yǎng)容器表面，較大程度的收獲細(xì)胞；
2、橫肋的聚苯乙烯（PS）手柄提供更大的剛性以更好控制來刮取細(xì)胞；
3、高柔性的熱塑性彈性體（TPE）葉片提供多重角度，以保證從完整生長(zhǎng)表面刮取細(xì)胞；
4、四種尺寸的細(xì)胞刮刀（刮匙）——不同的刀片和手柄長(zhǎng)度，以滿足用戶的多方位需求；
5、獨(dú)立無菌包裝，易撕開，醫(yī)療級(jí)別包裝，保證使用便利性和安全型。
細(xì)胞刮刀實(shí)驗(yàn)步驟：
無菌條件下取新生小牛大腦皮層灰質(zhì)部，4℃D-Hank′s液洗滌4次，至無血跡殘留。剪成1mm3左右的組織碎塊并置于玻璃勻漿器內(nèi)，加入兩倍體積的MEM培養(yǎng)基，勻漿上下20次？勻漿液先用100目尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾，培養(yǎng)基洗滌4次，收集濾液。然后用200目尼龍網(wǎng)布式漏斗抽濾，MEM培養(yǎng)基洗滌4次。細(xì)胞刮刀收集200目尼龍網(wǎng)上的組織，將其置于離心管中，1500r/min離心洗滌10min。離心洗滌的腦微血管懸浮于的0.1%膠原酶中，旋渦振蕩15sec以充分混勻，置于37℃恒溫振蕩水浴箱中振蕩消化50min，取出后旋渦振蕩15sec，1500r/min離心10min，棄上清，用20%BCS的培養(yǎng)基懸浮，接種于明膠鋪被的培養(yǎng)瓶中，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37℃、5%CO2、飽和濕度條件下培養(yǎng)。靜置5～7天后，可見少量細(xì)胞生長(zhǎng)，20%BCS的MEM培養(yǎng)液換液，以后每2～3天換液一次，至細(xì)胞長(zhǎng)成致密單層后可傳代培養(yǎng)。
應(yīng)用[4][5]
細(xì)胞刮刀可以用于人羊膜上皮細(xì)胞胞外囊泡對(duì)角膜堿燒傷的治療作用及機(jī)制研究
人羊膜上皮細(xì)胞(human amniotic epithelial cell,hAEC)具有雙表面特性,它同時(shí)具有胚胎干細(xì)胞樣分化能力和間充質(zhì)干細(xì)胞樣免疫調(diào)節(jié)特性,具有促進(jìn)上皮再生、抗炎和抗纖維化的作用。細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是干細(xì)胞減輕炎癥、改變細(xì)胞信號(hào)并促進(jìn)組織損傷修復(fù)的關(guān)鍵機(jī)制和載體,它含有干細(xì)胞的活性成分,包括蛋白質(zhì)、核酸和脂類等,可以作為一種無細(xì)胞替代療法。此外,EVs促進(jìn)組織再生和功能恢復(fù)的能力與其親本細(xì)胞是一樣的。
提取羊膜組織的有效成分人羊膜上皮細(xì)胞來源的細(xì)胞外囊泡(human amniotic epithelial cell-derived extracellular vesicles,hAEC-EVs),用于治療兔角膜堿燒傷模型,觀察其治療效果,并探索其發(fā)揮治療作用的相關(guān)機(jī)制;致力于研究hAEC-EVs的制劑,為角膜堿燒傷的臨床干預(yù)提供新的方案。方法:第一部分:首先用胰酶/EDTA消化人羊膜組織,然后用細(xì)胞刮刀刮下hAECs,用hAECs培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng),通過顯微鏡鏡檢、細(xì)胞免疫熒光染色技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)對(duì)提取的hAECs進(jìn)行鑒定。通過超速離心法從培養(yǎng)的hAECs上清液中分離出hAEC-EVs,然后用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope,TEM)、納米顆粒追蹤分析技術(shù)(nanoparticles tracking analysis,NTA)對(duì)hAEC-EVs的外觀形態(tài)、粒徑大小和分布范圍進(jìn)行鑒定,用蛋白免疫印跡法對(duì)其特征表達(dá)蛋白進(jìn)行鑒定。
參考文獻(xiàn)
[1]Desmosterol suppresses macrophage inflammasome activation and protects against vascular inflammation and atherosclerosis[J].Xinbo Zhang;Jeffrey G.McDonald;Binod Aryal;Alberto Canfrán‐Duque;Emily L.Goldberg;Elisa Araldi;Wen Ding;Yuhua Fan;Bonne M.Thompson;Abhishek K.Singh;Qian Li;George Tellides;Jose Ordovás-Montanes;Rolando García Milian;Vishwa Deep Dixit;Elina Ikonen;Yajaira Suárez;Carlos Fernández-Hernando.Proceedings of the National Academy of Sciences.2021
[2]Regenerative therapy for the Cornea.[J].Kumar Ajay;Yun Hongmin;Funderburgh Martha L;Du Yiqin.Progress in retinal and eye research.2021
[3]TGF beta?1,?2 and?3 in the modulation of fibrosis in the cornea and other organs[J].Wilson Steven E..Experimental Eye Research,2021(prep)
[4]Subconjunctival injection of mesenchymal stem cells for corneal failure due to limbal stem cell deficiency:state of the art[J].Galindo Sara;de la Mata Ana;López Paniagua Marina;Herreras Jose M.;Pérez Inmaculada;Calonge Margarita;Nieto Miguel Teresa.Stem Cell Research&Therapy.2021
[5]胡淑琴.人羊膜上皮細(xì)胞胞外囊泡對(duì)角膜堿燒傷的治療作用及機(jī)制研究[D].同濟(jì)大學(xué),2022.